Радиопротекторы

Международный экологический университет им. А.Д. Сахарова

Факультет радиобиологии и экологической медицины

РАДИОПРОТЕКТОРЫ

Реферат студентки III курса:

Плотникова Анастасия Александровна

Минск

2001

СОДЕРЖАНИЕ:

Введение……………………………………………………………………………….3-4

Сведения из истории радиопротекторов……………………………………..5-7

Классификация и оценка эффективности радиозащитных средств…….8-12

Основные методы оценки эффективности радиопротекторов…………13-16

Серосодержащие радиопротекторы…………………………………………17-22

Амины……………………………………………………………………………..23-24

Антибиотики……………………………………………………………………...25-28

Фенолы……………………………………………………………………………29-31

Вещества естественного происхождения…………………………………..32-34

Биологическая роль меланиновых пигментов……………………………..35-37

Приложение…………………………………………………………………………..38-44

Список литературы……………………………………………………………………..45

ВВЕДЕНИЕ

Начиная с 1945 г. в связи с созданием атомных, а позднее и водородных бомб, их интенсивными испытаниями, с развитием атомной энергетики, и расширением сфер использования источников ионизирующего излучения в биосферу нашей планеты стало поступать большое количество радионуклидов. Попадая тем или иным способом в верхние слои атмосферы, последние быстро распространились по всему земному шару, выпадая на поверхность суши, океанов и морей.

Следствием этого явилось возрастание радиационного фона окружающей среды, который, следует отметить, на протяжении последних нескольких тысячелетий оставался относительно стабильным. Таким образом, в результате активной деятельности человека все живые организмы на планете стали подвергаться дополнительному действию радиационного излучения.

Вот почему перед человечеством неизбежно встает вопрос о проведении мероприятий по обеспечению радиационной безопасности. В связи с этим во всем мире ведутся активные поиски протекторов от воздействия как острого, так и хронического радиационного облучения, в том числе и средств ранней противолучевой терапии.

В Республике Беларусь проблема биологического действия ионизирующей радиации, особенно малых доз, и защита от нее продолжает, по-прежнему, оставаться одной из фундаментальных проблем в комплексе медико-биологических наук. И в настоящее время эта проблема чрезвычайно актуальна в связи с катастрофой на Чернобыльской АЭС, признанной самой значительной по своему техногенному воздействию катастрофой в мире, следствием которой явилось загрязнение значительных территорий нескольких государств.

На сегодняшний день можно с полной уверенностью утверждать, что уже ни у кого не вызывает сомнений факт высокой значимости использования комплексной защиты, которая, в свою очередь, наряду с методами физической защиты, в частности - экранированием, предполагает применение радиопротекторов.

Все противолучевые средства принято разделять на два класса - радиопротекторы и средства лечения лучевых поражений.

Радиопротекторы - это препараты (главным образом синтетические), которые имеют наибольший эффект при введении за некоторое время перед облучением, присутствуют в радиочувствительных органах (нередко в максимально переносимых и субтоксических дозах) и переводят организм в состояние повышенной радиорезистентности. Средства лечения лучевых поражений применяются после облучения и формирования основных синдромов лучевого поражения. Они направлены на их преодоление за счет заместительной и стимулирующей терапии.

Одним из недавно появившихся направлений поиска противолучевых средств являются средства ранней патогенетической терапии. Это особый класс соединений, которые способны повлиять на формирующийся под воздействием ионизирующего излучения патологический процесс на ранних стадиях. Имеющиеся литературные данные позволяют рассматривать хроническое облучение как длительный радиационный стресс, подкрепляемый совокупностью экологических и психосоциальных стресс-агентов., В патогенезе этого стресса решающую роль играют активация свободнорадикального окисления, нарастающий оксидантный дефицит и нейроэндокринная и иммунная дисрегуляция. Эффективные средства коррекции этих изменений включают в себя следующие подклассы: антиоксиданты, антистрессовые препараты (адаптогены) и иммуномодуляторы.

Данная работа будет посвящена рассмотрению радиопротекторов, их классификации, механизмам действия.

СВЕДЕНИЯ ИЗ ИСТОРИИ РАДИОПРОТЕКТОРОВ

История исследования радиопротекторов насчитывает около 50 лет. Данный класс веществ был открыт в связи с интенсивным развитием радиобиологических исследований во всем мире после использования США атомного оружия против Японии для бомбардировки городов Хиросима и Нагасаки. На первых этапах изучения радиопротекторов была найдена большая группа серосодержащих соединений, обладающих большим радиозащитным эффектом. Период с конца 50-х до середины 70-х г.г. охарактеризовался широким поиском радиопротекторов среди серо- и азотсодержащих препаратов. В настоящее время радиопротекторы найдены среди широкого круга соединений (это и биологически активные природные лекарственные препараты). Именно поэтому традиционно сложившийся термин “химическая защита” не совсем годен для определения данной группы веществ.

Первые предположения о механизме радиационного действия сделал Г.Баррон, основываясь на господствующей тогда теории о непрямом действии ионизирующей радиации: первоначальное образование химически высокоактивных агентов, которые способны непосредственно передавать энергию ионизирующих частиц молекулам биосубстрата и тем самым повреждать их. Он исходил из того, что при облучении радикальные частицы нарушают в первую очередь структуру сульфгидридных ферментов, что, по его мнению, и является причиной развития всех постлучевых изменений.

Затем в лаборатории H.Patt было показано, что аминокислота цистеин, введенная перед облучением, защищает животных от действия летальных доз рентгеновского излучения. Работы H.Patt были признаны во всем мире, а их результаты привлекли широкое внимание к радиозащитному эффекту, что привело к быстрому накоплению новых материалов в радиационной фармакологии.

Однако по мере накопления новых экспериментальных данных стали появляться факты, которые не укладывались в рамки “сульфгидридной” гипотезы Баррона. Противоречащими фактами явились отсутствие данных о снижении активности тиоловых ферментов, а также безуспешными оказались попытки обнаружить угнетение анаэробного гликолиза сразу же или после облучения смертельными дозами. Так как многие ферменты этих процессов содержат тиоловые группы в активных центрах, то эти данные можно считать опровергающими теорию Баррона. Работы Баррона сыграли важную роль в становлении и развитии химической защиты, несмотря на недостаточность его теории.

Следующим этапом развития явилось открытие радиозащитных свойств тиомочевины. И хотя ее эффект невелик, это открытие заслуживает внимания, т.к. заставило ученых предположить возможное участие аминогрупп в противолучевом эффекте радиопротекторов. Результаты не заставили себя ждать: бельгийским ученым Баком было синтезировано соединение -меркаптоэтиламин, содержащее в своем составе декарбоксилированную аминогруппу цистеина. Это событие можно считать великим открытием в химии радиопротекторов. -меркаптоэтиламин оказывал высокую защиту при эффективных концентрациях в 5-6 раз меньших, чем у цистеина.

В то время взгляды на механизм радиопротективного действия заключались в концепции о конкуренции за свободные радикалы между защитными соединениями и чувствительными к облучению биосубстратами. Т.е. протектор - вещество, которое вступает во взаимодействие с активными молекулами среды и биосубстрата раньше, чем они прореагируют между собой.

Программы поиска радиопротекторов, исследования их формакокинетики приобрели наибольший размах в США.

В 1955 г. американскими радиобиологами был открыт S-аминэтилизотиуроний. Однако, как и все серосодержащие препараты, он обладал высокой токсичностью, хотя нельзя не указать его неплохое защитное действие.

Основной задачей, поставленной перед учеными, было изыскание радиопротектора, обладающего большой эффективностью, и в то же время нетоксичного и удобного в применении.

К 1959 г. было предложено около 1500 соединений, большинство из которых было синтезировано радиобиологической лабораторией в Чикаго. Было показано, что самыми лучшими препаратами, хотя бы частично удовлетворяющими требованиям к радиопротекторам, стали меркаптоэтиламин и меркаптоэтиламидин. И именно эти соединения стали базой для синтеза еще 850 препаратов, половина из которых обладало достаточно выраженными защитными свойствами.

Очень широко также изучалось комбинированное воздействие радиопротекторов. Особенно часто комбинировали радиопротекторы с различным механизмом действия, например, меркаптосоединения с метгемоглобинобразователями. Одновременно ученые пытались найти пути пролонгирования защиты; один из таких методов - введение в состав радиопротектора липофильных группировок до сих пор остается актуальным в решении проблемы увеличения временной защиты.

К 1969 г. по прорамме изыскания противолучевых средств в США было предложено более 4000 соединений. Однако для клинических испытаний были взяты только WR 638 (аминоэтилтиофосфорная кислота) и WR 2721 (аминопропиламиноэтилтиофосфорная кислота). Испытания на добровольцах этих двух препаратов прошли очень успешно. Но вскоре оказалось, что даже этот “выдающийся радиопротектор” не отвечает многим требованиям использования фармокологических препаратов.

В Советском Союзе ученые вели поиск радиопротекторов таким образом, что исследования давали возможность полученные соединения изучать с точки зрения моделирования радиационного эффекта от химической структуры вещества. Этот метод поиска сильно отличался от американского пути, по которому велся широкий скрининг препаратов. Следует отметить, что советский подход в большей степени чем американский способствовал установлению ряда важных закономерностей и внес определенный вклад в теорию химической защиты от ионизирующих излучений.

КЛАССИФИКАЦИЯ И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ РАДИОЗАЩИТНЫХ СРЕДСТВ

В настоящем времени радиопротекторы найдены среди широкого круга различных по происхождению веществ, поэтому классификация их по фармакологическому действию сильно затруднена. В связи с этим в радиобиологии утвердилось разделение защитных средств в зависимости от длительности их действия и сроков развития радиозащитного эффекта.

Итак, все радиопротекторы разделены на две основные группы: кратковременного и пролонгированного действия.

К кратковременным радиопротекторам относятся препараты, защитное действие которых проявляется на протяжении 0.5-4 часа после введения. Они наиболее эффективны при облучении организма максимально переносимыми дозами. В качестве средств индивидуальной защиты эти препараты могут быть использованы при защите от поражения ядерным оружием, перед радиотерапевтическим облучением в медицине, в космонавтике при долговременных полетах для защиты от солнечных вспышек.

К средствам длительной защиты относят препараты, обладающие радиозащитой от одних суток до нескольких недель. При импульсном воздействии ионизирующего излучения они обычно проявляют меньший эффект чем средства кратковременной защиты. Практическое применение этих протекторов возможно у профессионалов, работающих с ионизирующим излучением, у космонавтов при длительных полетах, а также при долговременной радиотерапии.

Таким образом, для каждого конкретного случая может быть подобран соответствующий класс радиопротекторов. Но вместе с этим существуют определенные правила, к которым он должен быть максимально приближен:

Препарат должен обладать достаточной эффективностью и не вызывать побочных реакций.

Должен действовать быстро (в пределах первых 30 мин) и сравнительно продолжительно (не менее 2-х часов).

Должен быть нетоксичным с терапевтическим коэффициентом не менее 3.

Не должен оказывать кратковременного отрицательного влияния на трудоспособность человека или ослаблять приобретенные навыки.

Иметь удобную лекарственную форму.

Не должен снижать резистентность организма к другим неблагоприятным факторам среды.

Не должен оказывать вредного воздействия при повторном введении или обладать коммулятивными свойствами.

Препарат должен быть устойчив при хранении, сохраняя свои защитные и фармакологические свойства не менее 3-х лет.

В радиотерапии к радиопротекторам предъявляются менее строгие требования. Но они усложняются важным условием, а именно: необходимостью дифференцированного защитного действия. Следует обеспечить высокий уровень защиты здоровых тканей и минимальный - тканей опухоли. Такое разграничение позволяет усилить действие местно примененной терапевтической дозы облучения на опухолевый очаг без серьезного повреждения окружающих его здоровых тканей.

Препараты кратковременного действия в зависимости от структуры и механизма защитного эффекта подразделяются на следующие группы:

Серосодержащие соединения (-меркаптоэтиламин (МЭА), цистамин, L-цистеин, гаммафос, цистофос и др.).

Биологически активные амины (серотонин, 5-метокситриптамин, адреналин).

Препараты, нарушающие в организме транспорт кислорода (метгемоглобинообразователи) или его утилизацию клетками (цианиды, нитриты).

Производные имидазола.

Арилалкиламины.

Индолилалкиламины.

Другие радиопротекторы.

Серосодержащие радиопротекторы на современном этапе развития науки признаны самыми эффективными. Большинство соединений этой группы являются производными одного из первых изученных противолучевых препаратов - -меркаптоэтиламина. Противолучевая активность серосодержащих радиопротекторов связывается с наличием свободной или легко освобождающейся SH-группы. К более благоприятным фармакологическим препаратам относятся производные тиофосфорной кислоты - тиофосфаты. У них SH-группа “прикрыта” остатком фосфорной кислоты, что определяет их малый гипотензивный эффект и меньшую токсичность.

Индолилалкиламины (серотонин, триптамин, 5-метокситриптамин) уступают серосодержащим радиопротекторам только при облучении нейтронами и оказывают защитное действие на меньших промежутках времени. К явным преимуществам аминов относят быстрое развите защитного эффекта и большую эффективность в малых дозах. Следует отметить, что изучение производных индолилалкиламинов проводилось главным образом советскими учеными.

Цианиды способны блокировать активность железосодержащих дыхательных ферментов, таких как цитохромоксидаза, которая обеспечивает перенос электронов от цитохрома к кислороду.

Радиопротекторы пролонгированного действия. Недостатки существующих в настоящее время радиопротекторов химических радиопротекторов (главным образом побочные токсические эффекты и ограниченная продолжительность действия) послужили основанием для исследования радиозащитных свойств малотоксичных веществ биологического происхождения. В этом направлении ведется поиск средств, котрые бы повышали общую устойчивость организма и сопротивляемость инфекциям, а также стимулировали активность кроветворной системы.

В настоящее время к обнаруженным веществам с такими свойствами относятся, например, металлокомплексы порфиринов. Изучено огромное количество веществ природного происхождения в качестве возможных противолучевых средств. Наиболее часто исследовались различные вытяжки из растений, микроорганизмов и другие биологические обьекты без выделения активных веществ, а порой и без контроля за чистотой препаратов. Для радиопрофилактики применялись сильнодействующие биологически активные вещества в малых концентрациях: яд змеи, пчелиный яд, бактериальные эндотоксины, горморны эстрогены.

Выраженным, статистически достоверным радиопрофилактическим действием как при кратковременном, так и при пролонгированном облучении (с малой мощностью дозы - 0.1 Гр/мин) обладает мелиттин (полипептид из пчелиного яда, сосотоящий из 26 аминокислотных остатков,М-2840). Бактериальный эндотоксин, выделенный из Salmonella typhi, смягчал пострадиационное поражение и в том случае, если вводился через 30 мин после окончания облучения. Защитное действие было обнаружено у полисахарида зимозана, выделенного из дрожжевых клеток, у полисахаридов, выделенных из бактерий Salmonella paratyphi и Proteus vulgaris.Наибольший статистически значимый эффект отмечен у эстрадиола по сравнению с метилтестостероном, диэтилстильбэктролом, дипропионатэстрадиолом.

В качестве противолучевых средств и препаратов, применяемых в комбинациях с эффективными радиопротекторами, часто используются продукты метаболизма: нуклеиновые кислоты, витамины, коферменты, углеводы, липоиды, флавоноиды, аминокислоты, промежуточные продукты обмена.

Неспецифическое радиозащитное действие оказывает внутрибрюшинное введение 1,5 мл кипяченого коровьего молока за 1-2 сут. до тотального рентгеновского облучения. В других работах было выявлено радиопротективное действие парентерального введения цельной цитратной крови, экстракта крови солкосерила, бензольного экстракта клеток крови человека. Применение сывороточных глобулинов с нормальными аутоантителами перед облучением (или в лечебном варианте после него) повышало выживаемость мышей, морских свинок, крыс, кроликов, подвергнуых летальному -облучению в дозах ЛД_80-100/30.

К числу противолучевых препаратов пролонгированного действия относятся также природные адаптогены. В отличие от радиопротектов они обладают неспецифическим действием, повышая общую сопротивляемость организма к различным неблагоприятным факторам. Адаптогены проявляют радиозащитную способность если их вводить многократно за много дней до облучения в дозах, ниже летальных. Они эффективны при остром, но при пролонгированном или фракционированном облучениях дают наибольший эффект. Омечаются также отсутствие побочных эффектов при использовании радиозащитных доз адаптогенов. Наиболее эффективными препаратами этой группы являются экстракты жень-шеня, элеутерококка, китайского лимонника. Явное снижение чувствительности лабораторных животных обнаружено при введении перорально сухого экстракта гречихи, а также при блокаде ритикулоэндотелиальной системы с пормощью частиц угля, полестерола, латекса или гликогена. Однако в целом механизм радиозащитного действия адаптогенов на организм пока не выяснен. Некотрые авторы к адаптогенам причисляют АТФ и АДФ, аденин нуклеотиды, что связано с их нормализующим влиянием на энергетический и генетический аппараты клеток. Установлено, что многократное 20-суточное внутримышечное введение витамина С повышало радиорезистентность лягушек, голубей, мышей. Было замечено также, что на радиорезистентность лабораторных животных благотворное влияние оказывает рациональное питание, что открывает перспективы эффетивной длительной защиты организма от летального воздействия ионизирующего излучения.

ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ РАДИОПРОТЕКТОРОВ

Более 20 лет в радиобиологии существует термин “идеальный радиопротектор”, но его содержание постоянно обновлялось и обогащалось.

Считается, что основные критерии применимости радиопротекторов должны соответствовать их целевому назначению с учетом того, как они могут использоваться:

как средства индивидуальной химической защиты от внешнего воздействия ионизирующего излучения при сравнительно кратковременном облучении в дозах с бльшой мощьностью (например, при ядерных взрывах, солнечных вспышках);

для защиты от радиации при длительном облучении в дозах с малой мощностью (например, при прохождении радиактивного облака, при длительных космических полетах);

в качестве средств, повышающих устойчивость организма к радиации при рентгено- и радиотерапии.

Существуют различные способы оценки радиозащитной способности противолучевых средств. При этом можно использовать такие критерии как влияние радиации на продолжительность жизни и выживаемость.

Выживаемость животных - наиболее простой способ определения защитной способности препарата. Обычно о защитной способности судят по разности между выживаемостью в течение месяцев после облучения в опыте и в контроле (в процентах), либо по отношению этих показателей (индекс эффекта). Наиболее четкие результаты наблюдаются, как правило, при дозе, равной или превышающей величину ЛД₁₀₀. В этом случае, когда доза излучения ниже, и в контроле погибают не все животные, а протектор характеризуется 100%-ой эффективностью, разность между опытом и контролем уменьшается и, следовательно, данные о защитной способности протектора будут занижены.

ФИД или ФУД - фактор изменения (уменьшения) дозы определяется по отношению равноэффективных (по поражающему действию) доз излучения в опыте и контроле. Это отражает общепринятое представление, согласно которому протектор как бы снижает величину поглощенной дозы радиации. Иными словами, реакция предварительно защищенных и затем облученных животных (клеток) слабее, как если бы они получили меньшую, чем в контроле, дозу. Для определения величины ФУД большое значение имеет выбор доз, для млекопитающих чаще всего используют отношение ЛД_50/30 в контороле:

При оценке противолучевой эффективности препаратов облучение животных с протектором (опыт) и без него (контроль) необходимо производить одновременно. Это диктуется необходимостью строгого соблюдения правил облучения и дозиметрии. По количественному критерию выживаемости ФУД учитывают действие различных доз излучения.

Для практической применимости препарата необходимо сопоставление защитных и летальных доз. Такое сопоставление включает в себя “терапевтический индекс”, “терапевтическую широту”, “протекторный индекс”.

П.Эрлих определил терапевтический индекс как отношение минимально активной дозы к максимально переносимой. Позднее вместо них стали использовать полулетальную дозу и дозу, излечивающую 50% животных. В применении к радиопротекторам Д.Томсон определил терапевтический индекс (Т.И.) как отношение полулетальной дозы к эффективной (в защитном отношении) дозе:

Препараты, имеющие терапевтический индекс больше 3, относятся к слаботоксичным.

Терапевтическую широту определяют по отношению максимально переносимойц дозы к радиозащитной дозе препарата.

Одним из качественных показателей эффективности радиопротекторов является протекторный индекс (I). Достоинство такого способа оценки противолучевой активности заключается в учете, наряду со степенью защиты, терапевтической широты их действия. Протекторный индекс выражается следующей формулой:

где ЛД₅₀ - доза вещества, вызывающая гибель 50% животных,

ЭД - доза вещества, приводящая к эффекту защиты,

а - процент животных, выживших при использовании эффективной дозы, при 100%-ой гибели животных, облученных без защиты протектором;

Существующая шкала эффективности радиопротекторов позволяет дифференцированно оценивать эффективность последних.

Шкала эффективности радиопротекторов Таблица 1

0 - 1	2 -5	6 - 10	11 - 14	>15
Неэффективен	малоэффективен	умеренно эффективен	эффективен	высоко эффективен

Для учета токсических эффектов радиопротекторов используется коэффициент, отражающий вероятность защиты организма от радиационной гибели:

где СПЖ(0,0) - средняя продолжительность жизни животных в биологическом контроле;

СПЖ(Д₀,0) - то же для животных, облученных в дозе Д₀ (контроль);

СПЖ(Д₀,Д_а) - то же для животных, облученных в дозе Д₀ при использовании средства “а” защиты в дозе Д_а (опыт);

Этот показатель используют в том случае, когда хотят определить какая часть особей, подвергнувшихся действию летальной дозы радиации, может быть защищена от гибели.

В том случае, когда исследования ведутся не на живых обьектах, а на культурах клеток, при цитогенетическом анализе используют коэффициент защиты А, котрый отражает вероятность эффекта защиты и выражается отношением разности между показателями поражаемости без защиты (а) и с применением защиты (b) к величине поражаемости без защиты:

СЕРОСОДЕРЖАЩИЕ РАДИОПРОТЕКТОРЫ

Первая попытка защитить от облучения наследственные структуры половых клеток была сделана в 1953 г. с помощью самого: эффективного в то время' радиопротектоpa - цистеамина (МЭА). Было проведено две серии экспери­ментов с дрозофилой и мышами, в результате которых уменьшение мутагенного действия облучения не было обнаружено.

Попытка уменьшить с помощью цистеамина мутагенный эффект облучения у тутового шелкопряда была предпринята в 1955 г. Наряду с этим исследовался генетический эф­фект цистеина, защитное действие которого против вызванной облучением гибели было показано в 1949г. на мышах. Оказалось, что оба препарата не уменьшают частоту радиомутаций у тутового шелкопряда. Одновременно проводи­лось генетическое изучение цистеина на дрозофиле. Защитный эффект обнаружить не удалось.

В 1955 г. был выявлен еще один радиопротектор - гуанидиновое производное цистеамина - АЭТ. Этот препарат оказался эффективным в защите от биологических эффектов облучения и менее токсичным по сравнению с другими SH-про-текторами. Поэтому АЭТ неоднократно исследовали с точки зрения его радиозащитного действия, в том числе от генетиче­ского эффекта облучения. Так, уже в 1958 г. было изучено вли­яние АЭТ на мутагенный эффект облучения у дрозофилы и установлен эффект истинной сенсибилизации вместо защи­ты.

Производное АЭТ - аминоэтилизотиуромочевина. В ре­зультате ее испытаний было обнаружено, что она не яв­ляется защитным препаратом против индуцированных облу­чением доминантных леталей у мышей. Авторы предполагали, что причина полученных отрицательных результатов - низкая концентрация препарата в зародышевых клетках в период облучения. Действительно, при исследовании распределения цистеамина в организме мыши с помощью S³⁵ наблюда­лось неравномерное распределение протектора по органам -через 20 мин после внутривенной инъекции концентрация пре­парата в семенниках была очень низкой. Вместе с тем су­ществовали данные о снижении стерильности облученных жи­вотных при обработке их протекторами. Так, в одной работе об­наружено уменьшение стерильности самок, а в другой работе - самцов облученных мышей, которым инъецировали цистеамин. Показано, что инъекции цистеамина крысам до облучения за­метно ослабляют процесс гибели сперматогониев. Эти факты свидетельствовали о том, что даже малое поглощение протектора половыми клетками все-таки обеспечивает осуще­ствление защиты их от гибели. Были основания полагать, что агенты, защищающие зародышевые клетки от гибели, могут защищать их и от генетических повреждений. Также было проведено исследование по той же методике с це­лью перепроверки результатов изучения генетической эффек­тивности цистеамина. Удалось показать, что цистеамин, не влияя на гибель эмбрионов в необлученной группе, снижает ее у облученных животных. При облучении мышей в дозе 300 Р частота доминантных летальных мутаций уменьшается с 26,9 до 22,7 %, а при облучении в дозе 600 Р - с 41,4 до 34,5 %.

Обнаружилось расхождение результатов с результатами, получен­ными в других работах. Это можно объяснить различием в сро­ках введения препарата, который вводился одними авторами за 15 мин до облучения, в то время как в данных работах препарат вводил­ся за 4-7 мин. Этот интервал мог оказаться недостаточным для проникновения вещества в сперму.

Аналогичные результаты были получены и в еще одной работе при исследовании, проведенном на мышах и на обезьянах. Внутрибрюшинное введение цистеамина за 10 мин до облуче­ния различными дозами рентгеновского излучения снижало частоту хромосомных перестроек в зародышевых клетках мы­шей в среднем на 42,7 %. Обезьян облучали в дозе 200 Р и так­же обнаружили уменьшение числа хромосомных аберраций в сперматоцитах первого порядка на 50,8 %.

Однако вслед за работами, показавшими защитный эффект цистеамина против мутагенного действия облучения, появи­лась целая серия генетических исследований, в которых серосодержащие препараты оказались либо неэффективными, либо усиливали мутагенное действие облучения. Так, совместное действие АЭТ и рентгеновского излучения исследовалось на дрозофиле . Введение АЭТ усилило радиочувствитель­ность всех стадий сперматогенеза. К тому же АЭТ в этих опы­тах оказывал и мутагенное действие, в 2 раза увеличивая час­тоту сцепленных с полом летальных мутаций.

Наряду с этим было установлено, что цистеин не уменьша­ет выхода сцепленных с полом рецессивных деталей, а АЭТ усиливает частоту таких радиомутаций у дрозофилы.

Возможности уменьшения мутагенного эффекта облуче­ния детально исследовались с помощью сульфгидрильных со­единений у дрозофилы. Изучалось влияние трех препара­тов - цистеамина, АЭТ и глютатиона на возникновение самых разнообразных мутаций: РЛМ, транслокаций, делеций, ДЛМ, а также потерь Х- и Y-хромосом. Изучение проводилось с учетом всех стадий сперматогенеза. Оказалось, что ни один препарат не снизил частоты ни одного типа мутаций ни на одной стадии развития зародышевых клеток. Более того, цистеамин увели­чивал выход всех типов радиомутаций (кроме транслокаций) на той или другой стадии сперматогенеза. Глютатион увеличи­вал частоту потерь хромосом в сперматоцитах и доминантных летальных мутаций в сперматидах. Автор предположил, что изученные им препараты повышают частоту мутирования, за­тормаживая восстановительные процессы или уменьшая вре­мя, в течение которого происходит фиксация мутаций.

Полученные отрицательные результаты поставили под со­мнение возможность генетической защиты от облучения. Однако Кункель описал возможные физико-химические меха­низмы генетической защиты и признал такую защиту теорети­чески возможной. В то же время приведенные им данные гене­тических исследований цистеина и АЭТ на дрозофиле показа­ли, что цистеин не влияет на частоту индуцированных облуче­нием рецессивных летальных мутаций, а усиливает мутаген­ное действие облучения на 37 %. Вот почему вопрос о практи­ческой возможности защиты от радиогенетических поражений остался без ответа.

Тем не менее среди серии отрицательных результатов были и положительные. Эксперименты выполнялись на мы­шах. Показано, что и цистеин, и АЭТ уменьшают на 6 % частоту ДЛМ, вызванных облучением в спер­матидах мышей (защита на прочих стадиях не была сущест­венной).

Защитный эффект при использовании АЭТ обнаружен и в работах, в которых исследовалось его влияние на эмбриональную гибель, обусловленную возникновением ДЛМ, на разных стадиях сперматогенеза у мышей. АЭТ защищает спермии мыши от возникновения в них радиомутаций при об­лучении в дозе 1200 Р и неэффективен при дозе 400 Р. Что же касается сперматид, то в них АЭТ снизил значительно предимплантационную гибель, вызываемую дозой 1200Р, и незначи­тельно постимплантационную гибель при дозе 400 Р. Влияние АЭТ исследовалось на мутагенный эффект облучения у мы­шей по тесту хромосомных перестроек в сперматоцитах. Эффект АЭТ, как и в первом случае, зависел от дозы ра­диации: при дозе 100 Р препарат вызывал статистически досто­верную защиту (на 30 %), а при дозе 200 Р введение АЭТ, наобо­рот, усиливало повреждающее действие облучения. Исследо­вания влияния АЭТ на частоту доминантных летальных мута­ций, индуцированных облучением у мыши, подтвердили спо­собность этого соединения защищать от генетических повреж­дений. Правда, эффект был обнаружен только для сперматоцитов при облучении их в дозе 400 Р. Клетки, находящие­ся на прочих стадиях сперматогенеза, защитить с помощью АЭТ не удалось. Одновременно изучался и цистафос, но он не дал никакого защитного эффекта.

Препараты АЭТ и цистеамин изучались также и на кроли­ках с учетом частоты ДЛМ. Поскольку многие авторы свя­зывали неудачи в осуществлении защиты половых клеток от облучения с плохим проникновением протектора в гонады через физиологические барьеры, в данном случае проводились облучение и обработка спермиев кролика in vitro. Защитные вещества вводились в эякулят, и спермии таким образом об­лучались либо в физиологическом растворе, либо в растворе протектора. Оказалось, что и в этом случае ни АЭТ, ни цисте­амин не уменьшали мутагенного действия f -лучей. Получен­ный результат уже нельзя объяснить непроникновением про­тектора в гонады, поэтому авторы считали более вероятным, что эти соединения не могут вступать в реакции, ведущие к защитному эффекту, с соответствующими молекулами, и в пер­вую очередь с ДНК, сосредоточенной в головке сперматозоида.

За последующие 10 лет появились еще 4 работы, в которых изучалось радиозащитное действие сульфгидрильных соеди­нений против мутагенного эффекта облучения у животных. В одной из них исследовалось влияние цистеамина на частоту РЛМ. У дрозофилы эффекта обнаружено не было. Эта работа еще раз показала, что цис­теамин не способен защищать половые клетки дрозофилы от возникновения в них радиомутаций. К такому же выводу при­шли и авторы другой работы, показавшие отсутствие защитного действия цистеамина против индуцированных облучением рецессивных летальных мутаций у дрозофилы. Однако им уда­лось показать, что АЭТ снижает выход таких мутаций. Выяви­лись некоторые специфические особенности этого препарата. Так, АЭТ, снижая частоту хромосомных деталей, одновремен­но увеличивает процент выхода хромосомных семилеталей.

Было показано отсутствие защитного эффекта цистеамина против инду­цированных рентгеновским излучением генетических повреж­дений у дрозофилы, хотя глута-тион в их опытах проявил защитное действие.

Четвертая работа выполнена на мышах. При исследо­вании выхода доминантных летальных мутаций в постсперма-тогониальных стадиях обнаружено, что при облучении в дозе 100 Р цистамин повышает постимплантационную гибель эмбри­онов, при облучении в дозе 300 Р, наоборот, снижает ее, а при облучении в дозе 600 Р оказывается неэффективным. На выход реципрокных транслокаций в сперматогониях мышей циста-мин не влияет.

Поскольку проникновению радиопротекторов в гонады препятствует гематотестикулярный барьер, который начинает функционировать у млекопитающих в первые недели постнатального периода, Померанцева предположила, что сте­пень защитного эффекта протектора можно увеличить, если препарат ввести до начала функционирования этого барьера. Для проверки данного предположения цистамин вводили бере­менным самкам накануне родов за 15 мин до облучения в дозе 3 Гр. В этот срок половые клетки самцов являются гоноцита-ми. Поскольку чувствительность эмбрионов к токсическому действию протектора выше, чем у взрослых животных, то кон­центрация вводимого цистамина составляла 50 мг/кг, т. е. в три раза ниже, чем та, которая применялась для защиты взрос­лых животных. Экспериментально было показано, что циста-мин в такой дозе не снижал выхода реципрокных транслока­ций, индуцированных облучением в сперматогониях полово­зрелых мышей. Оказалось, что использование цистамина для защиты самцов, облученных в эмбриогенезе, существенно сни­жает уровень реципрокных транслокаций, при этом степень защитного эффекта выше, чем при введении цистамина в трех­кратной концентрации взрослым животным.

Литературные данные о влиянии серосодержащих протек­торов на мутагенный эффект облучения, полученные разными авторами при испытании одних и тех же препаратов на одних и тех же объектах по исходным методикам, достаточно неодно­родны. При этом на насекомых положительные результаты в подавляющем большинстве случаев не достигнуты. Что же ка­сается исследований, проведенных на млекопитающих, то ре­зультаты их крайне противоречивы (табл. 2.1). Таким образом, эти сведения не дают возможности считать хотя бы какой-либо из серосодержащих протекторов эффективным радиозащит­ным средством против мутагенного эффекта облучения в по­ловых клетках животных.

АМИНЫ

По своему радиозащитному действию против ле­тального эффекта облучения некоторые амины соперничают с серосодержащими препаратами. Протекторные свойства ами­нов, очевидно, обусловлены создаваемой ими гипоксией. По­скольку путем снижения концентрации кислорода можно уменьшить генетический эффект облучения, казалось вероят­ным, что препараты, вызывающие гипоксию, проявят защитное действие и против мутагенного эффекта радиации. Однако при генетическом исследовании аминов, наиболее эффективных в защите от лучевой гибели, в большинстве случаев получены отрицательные результаты. Инъекции мегафена перед облучением не оказали никакого влияния на частоту рецессивных летальных мутаций у дрозофилы.

В то же время удалось показать, что инъекции серотонина уменьшают частоту индуцированных облучением ре­цессивных летальных мутаций в зрелых спермиях дрозофилы, хотя в более поздней работе получен противоположный эффект: под влиянием серотонина частота радиомутаций в зре­лых спермиях дрозофилы увеличивалась в 2 раза. Помимо эф­фекта сенсибилизации авторы обнаружили и сильный мутаген-ный эффект серотонина - уровень спонтанных мутаций под влиянием этого препарата повысился в 3 раза.

Аналогичные результаты получены в работе, в кото­рой авторы использовали те же концентрации серотонина (инъ­екции 1%-ного раствора) при облучении дрозофилы в той же дозе и получили увеличение выхода рецессивных сцепленных с полом мутаций в 2 раза.

Получен и другой результат: влияние серотонина на час­тоту рецессивных летальных мутаций у дрозофилы не об­наружено. Авторы, исследовали и эффективный радио­протектор - мексамин. Этот препарат также не защищал поло­вые клетки дрозофилы от возникновения в них хромосомных и хроматидных деталей и полулеталей. Однако в другой работе показана защита половых клеток мышей от индуцирован­ных генетических повреждений с помощью мексамина, но эф­фективность защиты зависела от стадии развития зародыше­вых клеток и дозы радиации. Так, при облучении сперматоцитов наблюдалось небольшое снижение частоты радиомутаций лишь при дозе 600 Р. При воздействии на сперматиды защит­ный эффект проявлялся лишь при дозе 400 Р, а при воздей­ствии на сперматозоиды мексамин оказался неэффективным при всех дозах облучения (200, 400, 600 Р).

Итак, все исследователи, изучавшие серотонин и аминазин (мегафен), показали либо отсутствие эффекта, либо эффект сенсибилизации (табл. 2.2). Действие мексамина проверено только в двух работах, причем на различных объектах. В одной ра­боте показано, что этот препарат защищает от облучения в дозе 400 Р только сперматиды, а при дозе 600 Р - только сперматоциты мышей. На дрозофиле защитного эффекта мексамина не обнаружено.

Таким образом, амины, так же как и серосодержащие ра­диопротекторы, малоэффективны (или совсем неэффективны) в защите половых клеток животных от мутагенного действия ионизирующей радиации.

АНТИБИОТИКИ

Особую группу среди модификаторов метаболизма представляют антибиотики. Их исследовали в качестве воз­можных протекторов против генетического эффекта облуче­ния у животных. Было исследовано два антибиотика: актиномицин Д и пенициллин. Актиномицин Д, вводимый с питательной сре­дой, эффективно (на 40 %} уменьшал частоту рецессивных ле­тальных мутаций в Х-хромосоме дрозофилы после рентгенов­ского облучения в дозе 3000 Р. Пенициллин также снижал час­тоту индуцированных облучением рецессивных летальных му­таций на всех стадиях развития зародышевых клеток. Резуль­таты эти были интересны, тем более что пенициллин не обла­дает такой высокой токсичностью, как серосодержащие радио­протекторы (однако в некоторых работах показано, что сам по себе пенициллин несколько повышает частоту спонтанных му­таций).

Некоторые ученые исследовали такие антибиотики, как актиномицин Д и хлорамфеникол. Оказалось, что оба антибио­тика уменьшали частоту индуцированных облучением мута­ций на стадии сперматид и поздних сперматоцитов, увеличи­вая их количество в зрелой сперме.

Аналогичные результаты при испытании актиномицина Д получены еще в одной работе: препарат способен уменьшать частоту рецессивных сцепленных с полом летальных мутаций, вызыва­емых у дрозофилы -у-лучами в дозе 600 рад на стадиях сперма­тид и сперматоцитов.

Однако после первых положительных результатов после­довал ряд работ по радиозащитному эффекту антибиотиков, в которых выявлена примерно такая же противоречивая кар­тина, как и при исследовании генетической защиты SH-содер-жащими протекторами. Так, при изучении актиномицина Д об­наружен не защитный, а усиливающий эффект этого соедине­ния. В 1965 г. вышла статья Оливьери, в которой был опи­сан эффект сенсибилизации в сперматоцитах дрозофилы под действием актиномицина Д (применялось В-излучение). При изучении влияния этого соединения на частоту вызванных об­лучением потерь и нерасхождения Х-хромосом у дрозофилы было показано, что актиномицин Д усиливает индукцию обоих типов мутаций на всех стадиях сперматогенеза, причем не только у облученных, но и у необлученных особей. При этом частота Х-хромосом увеличивалась под действием акти­номицина Д на два порядка по сравнению с контрольной группой.

При введении актиномицина Д частота ДЛМ в зрелых спермиях самцов повышалась в 4 раза по сравнению с контрольной группой. Этот высокий сенсибилизирующий эффект был статистически достоверен во всех проведенных экспериментах.

Что касается пенициллина, то при дальнейших исследова­ниях оказалось, что он снижает частоту радиомутаций не на всех, а лишь на некоторых стадиях сперматогенеза. При этом в одной работе показано, что пенициллин защищает только сперматиды, а в другой обнаружен радиозащитный эффект этого препарата в спермиях дрозофилы. Оба автора исследовали час­тоту рецессивных летальных мутаций в кольцевой Х-хромосоме. Методика проведения исследований в обеих работах раз­личалась только способом введения веществ в организм - в одном случае инъекции, в другом - скармливание с питатель­ной средой. Это позволило предположить, что разница в полученных результатах объясняется тем, что эффект пени­циллина обусловлен не прямой защитой от облучения, а вто­ричным влиянием на метаболическую активность развиваю­щихся зародышевых клеток. Поэтому для проявления защит­ного эффекта в зрелых спермиях пенициллин должен вводить­ся в организм задолго до облучения, как это происходит при выращивании мух на питательной среде с добавлением в нее препарата.

Наряду с пенициллином исследовались и антибиотики - хлорамфеникол и стрептомицин. Все эти три препарата одинаково (на 30-50 %) уменьшали частоту радиомутаций на стадии сперматид. Однако, по данным некоторых работ, стрептомицин не способен защищать зародышевые клетки дрозофилы от воз­никновения радиомутаций. В этих работах приме­нялись инъекции препарата в близких концентрациях самцам дрозофилы перед облучением их одинаковой дозой 1000 Р и исследовался один и тот же тест - частота рецессивных сцеп­ленных с полом летальных мутаций на всех стадиях спермато­генеза дрозофилы. Кроме того, в одной работе стрептомицин скармливался с питательной средой, но и этот метод не выявил способности препарата уменьшать частоту индуцированных облучением мутаций.

Влияние антибиотиков на генетический эффект облучения у млекопитающих впервые было изучено в работе Щао Вэй Ван, Ду Гул, Чтом Хань. Стреп­томицин в низких концентрациях (0,5-1 мг/мышь) вызывал уменьшение индукции хромосомных перестроек в половых клетках в среднем на 50 %, а в более высоких (3-5 мг/мышь) был неэффективным в защите от радиомутаций и повысил час­тоту спонтанных мутаций.

Хлорамфеникол и митомицин С исследовались на мышах. В результате исследований установлено, что хлорамфе­никол повышает выход ДЛМ в сперматозоидах более чем на 50 %, не влияя на радиочувствительность сперматид и не ока­зывая мутагенного действия. В то же время митомицин С ока­зался мутагеном для всех стадий сперматогенеза и проявил выраженный синергический эффект в сперматоцитах. Посколь­ку митомицин является ингибитором биосинтеза ДНК, было предположено, что синергический эффект в сперматоцитах является следствием взаимодействия ионизирующей радиа­ции и митомицина во время синтеза ДНК. Показано так­же, что внутрибрюшинные инъекции митомицина С увеличи­вают частоту индуцированных облучением мутаций специфи­ческих локусов в сперматогониях мышей.

Митомицин С исследовался и на дрозофиле. Результа­ты показали, что сам антибиотик вызывает высокую частоту мутаций на всех стадиях сперматогенеза. Примененный же перед облучением, митомицин проявляет аддитивное дейст­вие. Однако на стадиях поздних сперматид и ранних сперма-тоцитов суммарная часть мутаций уменьшается, а на стадии сперматогониев увеличивается. На основании этого автором сделан вывод, что снижение уровня радиомутаций под влия­нием митомицина С, как и актиномицина Д, на стадиях спер­матид и сперматоцитов является следствием ингибирования репликации ДНК.

Интересно, что полученный при исследовании митомици­на С противоположный результат (синергический эффект на стадии сперматоцитов) автор одной работы также объяснял спо­собностью данного антибиотика ингибировать биосинтез ДНК. В этом случае синергический эффект, по мнению автора, явля­ется следствием взаимодействия ионизирующей радиации и митомицина во время синтеза ДНК. При дальнейшем исследо­вании митомицина С было обнаружено, что он снижает частоту частичных видимых мутаций в 12 локусах, но не влияет на выход полных мутаций такого типа.

Результаты, полученные при испытании антибиотиков в качестве возможных протекторов против генетического дей­ствия облучения, трудносопоставимы, так как в большинстве исследований применялись различные методики и, в частно­сти, разные генетические тесты. Но даже в тех редких случаях, когда условия эксперимента были достаточно однородными, результаты оказывались разными (табл. 2,3).

ФЕНОЛЫ

Первые исследования влияния кислорода на гене­тическую радиочувствительность половых клеток показали, что облучение в кислороде повышает частоту радиомутаций, в то время как аноксия оказывает явное защитное действие. В дальнейшем была тщательно изучена роль кисло­рода и азота в радиационном поражении клеток, находящихся на различных стадиях сперматогенеза у дрозофилы.

Возможность изменения радиочувствительности зароды­шевых клеток под влиянием таких факторов, как гипоксия или облучение в кислороде, явилась предпосылкой для иссле­дования некоторых химических соединений - модификаторов метаболизма.

Так, в 1961 г. появилась работа, в которой сообщалось об исследовании ДНФ. Это вещество разобщает дыхание и окис­лительное фосфорилирование, не прерывая транспорта элект­ронов в дыхательной цепи. При введении ДНФ личинкам дро­зофилы двумя способами (скармливание и инъекции) была уменьшена частота рецессивных летальных мутаций, трансло­каций и нехваток, индуцируемых облучением в дозе 1000Р в сперматоцитах. В среднем защитный эффект составлял от 50 до 80 %.

Аналогичный эффект, хотя и меньший в количественном отношении, получен в другой работе при исследовании влияния ДНФ. Работа проведена также и на дрозофиле, препарат инъе­цировали в той же концентрации, изучались также спермато-циты, облученные в такой же дозе 1000 Р. Однако Стегер иссле­довал частоту ДЛМ и получил уменьшение этого типа радио­мутаций на 12 %.

Этот препарат исследовала Абелева Э.А. для выяснения вопроса, не влияет ли он на зрелые половые клетки дрозофилы. Ока­залось, что ДНФ эффективно защищает сперматиды (частота ре­цессивных летальных мутаций снижается на 30 %), но не защи­щает спермии. Однако в работе Иващенко Н.И. защита спермиев была осуществлена с помощью инъекции 2,4-динитрофенола, причем при увеличении концентрации препарата от 0,15 до 0,30 мкг на муху эффективность защиты увеличивалась с 30 до 50 %. При дальнейшем увеличении концентрации до 0,45 мкг защит­ный эффект не был обнаружен. Интересно отметить, что ДНФ в концентрации 0,30 мкг на муху оказал защитное действие не только на спермии, но и на радиочувствительные стадии -сперматиды и сперматоциты.

Таким образом, согласно работе Иващенко Н.И. эффективность ДНФ меняет­ся в зависимости от его концентрации. Поэтому отсутствие за­щиты спермиев в работе Абелевой Э.А. отнюдь не противоречит полу­ченным позднее результатам. Сравнивать эти работы трудно, несмотря на один и тот же объект исследования, одинаковые тесты и дозы облучения. Дело в том, что Иващенко Н.И. использовал инъекции препарата в строго определенной кон­центрации - от 0,06 до 0,45 мкг на муху, в работе же Абелевой Э.А. пре­парат скармливался с питательной средой в концентрации 0,5 мг/мл среды, что не дает сведений о количестве препарата, поступившего в организм дрозофилы.

Тем не менее в работах, выполненных по сходным методи­кам, получены аналогичные результаты. Во всех этих исследо­ваниях показано, что 2,4-динитрофенол защищает от мутагенного действия облучения радиочувствительные стадии дрозо­филы, а в работе Иващенко Н.И., кроме того, получено снижение частоты радиомутаций в спермиях.

Исключение составляет работа, выполненная также на дрозофиле, в которой ДНФ оказался неэффективным. Таким образом, некоторые фенолы, такие, например, как ДНФ, спо­собны защищать половые клетки дрозофилы от мутагенного действия ионизирующей радиации (табл. 2.4). К сожалению, в литературе нет сведений о влиянии этого препарата на гене­тический эффект облучения у млекопитающих.

Противопоказанием применения ДНФ в качестве радиопро­тектора служит его метаболическая активность, поскольку ве­щество препятствует окислительному фосфорилированию и является ассимиляторным ядом, так как может заменить' нор­мальное вещество в физиологических реакциях благодаря хи­мическому сходству с ним. Поскольку проводившиеся более 20 лет (с 1953 по 1975 г.) исследования показали, что тра­диционные радиопротекторы малоэффективны в защите поло­вых клеток животных от мутагенного действия облучения, поиски антимутагенных препаратов были перенесены в дру­гую область. Внимание исследователей привлекли природные соединения, представляющие интерес по двум причинам. Во-первых, известно, что некоторые виды живых организмов об­ладают высокой радиоустойчивостью. Следовательно, внутри организма существуют какие-то факторы резистентности. По­скольку в живой природе можно обнаружить такие совершен­ные формы и реакции, которые-намного превосходят приду­манные человеком аналоги, то поиски веществ, „созданных" эволюцией для защиты организма от облучения, могут быть весьма перспективными.

Во-вторых, естественные вещества для организма, даже будучи использованы в больших концентрациях, чем в норме, окажутся менее токсичными по сравнению с синтезированны­ми искусственно.

Все это побудило исследователей обратиться к таким со­единениям, как ДНК и ее предшественники, АТФ и т. д.

ВЕЩЕСТВА ЕСТЕСТВЕННОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

В первых работах по изучению предшественников ДНК было показано, что предварительное воздействие нуклеозидов уменьшает частоту радиационно-индуцированных сцеп­ленных с полом рецессивных летальных мутаций в постмейо-тических клетках дрозофилы. Обработка же предмейотических клеток галогеновыми производными пиримидина (5-бромдиоксиуридином и 5-бромдиоксицитидином) увеличи­ла частоту рецессивных летальных мутаций, но не повлияла на выход транслокаций в сперматогониях дрозофилы.

Иссле­довалось влияние препаратов ДНК на мутагенный эффект ионизиру-ющей радиации в половых клетках самцов мышей. Анализировались частота ДЛМ в пост-мейотических клетках и частота реципрокных транслокаций в сперматогониях. Под влиянием ДНК частота доминантных деталей в ранних сперматидах уменьшилась с 67,0 до 62,1 %. В поздних, наоборот, наблюдалось усиление мутагенного эф­фекта облучения. В сперматогониях частота транслокаций так­же возросла с 4,4 до 5,8 %. Более эффективным оказалось ис­пользование АТФ в смеси с радиопротекторами. Сообщается о защитной эффективности смеси АТФ с ацетуроном и АЭТ против индукции облучением транслокаций в сперматогониях мышей.

При применении АТФ в смеси с метионином и цистеином получено снижение выхода рецессивных сцепленных с полом летальных мутаций, индуцированных облучением у дрозофи­лы.

Хороший защитный эффект против генетических повреж­дений, вызванных облучением у мышей, был показан при ис­пользовании АТФ. Влияние смеси АТФ, АЭТ и серо-тонина, вводимой самцам внутрибрюшинно за 8 мин до облу­чения в дозе 400 Р, изучалось в соотношении 45:3:1. Частота индуцированных реципрокных транслокаций в сперматогониях мышей при этом снизилась примерно в 2 раза (с 8,65 ± 1,2 до 4,05 ± Ц,6 %). При исключении АТФ из смеси наблюдалась лишь тенденция к снижению частоты мутаций. В отсутствие облуче­ния АТФ снижал в 2'раза выход транслокаций, индуцирован­ных смесью АЭТ и серотонина (статистически недостоверно из-за малых величин).

Интересно, что при защите мышей от лучевой гибели вклад АТФ незначителен - защитное действие смеси АТФ + АЭТ + се-ротонин и смеси АЭТ + серотонин одинаково. Таким образом, эти исследования показали, что радиопротекторы АЭТ и серо­тонин, снижающие смертность облученных животных, малоэф­фективны против генетического действия радиации и для за­щиты от индуцированных облучением мутаций могут исполь­зоваться вещества, малоспособные повышать выживаемость облученных животных.

Внимание исследователей привлекла антимутагенная ак­тивность а-токоферола (витамина Е). Это соединение оказалось способным подавлять мутагенез, вызываемый химическими и физическими мутагенами, вирусами, старением и т. д. Исследовалась радиозащитная эффективность а-токоферола в половых клетках. Самцов дрозофилы, выращенных на среде с витамином Е, облучали рентгеновским излучением и через 24 ч скрещивали с виргиль-ными самками тесторной линии. При этом, если самки выращи­вались на нормальной питательной среде, снижение выхода ре­цессивных летальных сцепленных с полом мутаций не обнару­живалось. Если же не только самцы, но и самки вскармлива­лись питательной средой с токоферолом, то частота индуциро­ванных облучением мутаций значительно снижалась. Авторы предположили, что а-токоферол не влияет на образование пер­вичных радиационных эффектов, но модифицирует репарацию предмутационных повреждений, возникающих в зрелых поло­вых клетках самцов и репарируемых после оплодотворения ферментами самки.

Большое внимание уделяется исследованию антимутагенного действия различных растений. Многочисленные позитив­ные результаты, полученные при испытании антимутагенного действия растений, вызвали интерес к растительным экстрак­там и у радиобиологов. В частности, исследовалось влияние фитонцидов чеснока и вытяжки из листьев эвкалипта на мута­ционный процесс, индуцированный ионизирующей радиацией у дрозофилы. Показано, что использование чеснока не изменило индукции облучением рецессивных летальных мута­ций и транслокаций между II и III хромосомами, а вытяжка из эвкалипта оказала хорошее защитное действие против гене­тического эффекта т- лучей.

Таким образом, поиски эффективных противолучевых ан-тимутагенов продолжаются. Необходимо, чтобы они удовлет­воряли трем критериям:

стабильности,

эффективности

нетоксичности.

Однако ни один из известных нам радиопро­текторов не удовлетворяет данным критериям. Так, большинство традиционных радиопротекторов, имеющих стабильную химическую структуру, эффективны лишь в высоких токсич­ных концентрациях, а вытяжки растений практически неток­сичны, но не имеют стабильной химической структуры. Все это требует дальнейших теоретических и экспериментальных ис­следований с целью поисков оптимальных радиозащитных препаратов.

БИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ МЕЛАНИНОВЫХ ПИГМЕНТОВ

Меланины представляют собой конденсированные фенольные соединения. Они присутствуют в тканях растений, животных и многих микроорганизмов. В организме человека этот пигмент придает окраску волосам, бровям, ресницам, ра­дужной оболочке глаза, коже. В коже животных и человека присутствие и новообразование меланина представляет собой защитную реакцию организма на действие ультрафиолетового излучения.

Под влиянием ультрафиолета интенсифицируется процесс образования меланина из тирозина и других мономеров (за­гар - защитная реакция организма на воздействие солнечных лучей). Возникновение черной кожи у человека при продви­жении первоначальной белой расы в тропические районы про­изошло, по мнению Ленграйджа, в результате отбора мно­гих мелких мутаций, обусловливающих формирование все бо­лее и более темной кожи, что имеет большое адаптивное зна­чение в этих районах.

Образование меланина в организме придает ему устойчи­вость не только к ультрафиолету, но и ионизирующей ра­диации.

Так, у многочисленных видов микроскопических грибов, актиномицетов и некоторых бактерий бурые и черные мелани-новые пигменты служат защитой от жестких электромагнит­ных излучений и являются основной причиной высокой устой­чивости пигментированных микроорганизмов не только к ультрафиолетовому (в том числе и коротковолновому), но и к рентгеновскому излучению.

Штаммы микроорганизмов, содержащих меланиновые пиг­менты, настолько устойчивы к действию солнечного ультра­фиолета и космических лучей, что живут и размножаются в высоких слоях атмосферы, горах, пустынях, Арктике и Антарк­тике - там, где другие микроорганизмы погибают. Меланин в определенных условиях увеличивает выживание даже после абсолютно летальной дозы (ЛД₁₀₀) радиации.

Повышение естественного радиоактивного фона, обуслов­ленное применением радиоактивных веществ, нарушением хранения радиоактивных отходов и т. д., способствует преиму­щественному развитию темнопигментированных грибов, неко­торые из них выживают после облучения почвы дозой 6400 Гр. Имеются сведения о преимущественной встречаемости меланинсодержащих видов грибов в почвенных образцах, ото­бранных после взрыва атомной бомбы в районе атолла Би­кини.

В ряде работ показана повышенная радиоустой­чивость черных мышей, а также появление гиперпигментации у белых и серых в результате продолжительного облучения их малыми дозами гамма-лучей.

При сравнении выживаемости гамма-облученных белых и чер­ных штаммов дрожжей также выявлены различия, обуслов­ленные присутствием в клетках черного пигмента меланиновой природы. Клетки трансплантируемой меланомы хо­мячка, содержащие меланин, в 2 раза более устойчивы к ле­тальному действию радиации, чем такие же клетки, лишен­ные пигмента.

По данным одной работы, облучение аксолотлей дозами 500, 1500,3000 Р стимулировало процесс меланизации в печени, го­лове и глазах. Автор указывает, что такая гиперпигментация является защитной реакцией организма на облучение. Анало­гичные данные получены и при облучении гипофиза лягушки гамма-лучами: усилилось образование меланинов в меланофорах кожи вследствие выделения интермедина из средней доли ги­пофиза и изменения обмена тирозина. В первые часы по­сле облучения в тканях облученных животных наблюдается усиление окисления тирозина.

Меланины животного происхождения способны взаимо­действовать со многими радиоактивными элементами: цезием, радием, кобальтом, рутением, стронцием, торием, а также с ра­диоактивными изотопами цинка, кадмия, свинца, хрома, мар­ганца и железа. Было установлено, что меланин эффек­тивно сорбирует ионы различных металлов. Таким же об­разом меланины грибного происхождения сорбируют ионы Pb, Th, Hg, La, Zn, Cz. По-видимому, аналогичные свойства животного меланина ответственны за преимущественное на­копление ²²⁶Ra в пигментированных тканях животных, а также в меланоме. Если в среде концентрация ²²⁶Ra в пегментарных тканях животных, а также меланоме. Если в среде концентрация ²²⁶Ra со­ставляет 25,1 Ки/кг, то в меланоме накапливается до 40-360 Ки/кг.

Как отмечал Н. И. Вавилов, в центрах формообразования растений (центры происхождения растений – по Н.И.Вавило­ву) преобладают сильно пигментированные формы. Отбор че­ловеком светлоокрашенных форм растений при продвижении их культуры в более северные районы означает, по мнению Щербакова, отбор форм, менее защищенных от мутагенных факторов по сравнению с пигментированными дикорасту­щими формами.

Очевидно, не случаен тот факт, что ткани растений, окру­жающие генеративные ткани, окрашены пигментами, которые, вероятно, должны обеспечивать их защиту от мутагенов. На­личие форм с высоким содержанием пигмента характерно для высокогорных областей с повышенным уровнем ультрафиоле­товой радиации и космических лучей.

В ряде экспериментов были сделаны попытки использо­вать меланин для усиления биологической радиорезистентности. В одной работе из гриба Pullularia prototropha было выделе­но четыре фракции меланина, различающиеся растворимостью в щелочи и этаноле. Две из них оказывали защитное действие при облучении мышей рентгеновским излучением и увеличи­вали среднюю продолжительность жизни мышей в 1,5 раза. До­бавление меланина в питательную среду существенно повыша­ло выживаемость облученных культивируемых клеток соеди­нительной ткани мышей, а внутрибрюшинное введение меланина белым мышам до облучения их в дозе 800 Р, кроме того, значительно увеличивало и продолжительность жизни.

Сведения о влиянии меланина на мутагенное действие ра­диации до начала наших исследований отсутствовали. Однако установлено, что фенолы могут связываться с ДНК, в частно­сти с тимином. Радиационное повреждение ДНК как раз и начинается с тимина, а меланин способен не только улавли­вать и обезвреживать свободные радикалы, но и регулировать концентрацию неспаренных электронов. Кроме того, для ряда фенолов (Na-галлат, пропилгаллат, кумарины и катехи-ны) показана антимутагенная активность. В качестве одной из гипотез, объясняющих их антимутагенную способ­ность, предполагается взаимодействие фенолов с функцио­нальными группами ДНК, которое может экранировать важ­ные участки ДНК от действия мутагена или отводить избы­точную энергию. Это послужило предпосылкой для ис­следования способности меланина защищать наследственные структуры организма от индукции радиационных мутаций.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Таблица 2.1

Влияние серосодержащих радиопротекторов на мутагенный эффект облучения

Объект исследования	Концентрация	Время введения вещества до облучения, мин	Доза облучения, Р	Исследованные тесты		Стадии сперматогенеза	Полученный результат
-АЭТ
Дрозофила	0,15-0,30 	0	4000	РЛМ ДЛМ		—	Усиление
	0,1 мл	10	3000	РЛМ		Все стадии	>>
	0,1%	5-10	3000	>>		То же	>>
	0.3		2000	>>		>>	Нет эффекта
	0.5% (скармливание)		1000	>>		>>	защита
Мыши	8 мг/мышь	10	1200	ДЛМ		Спермии, сператиды, сперматогонии	>> нет эффекта то же
	50 мг/кг	15	400	ДЛМ		Спермии сперматиды	>> защита
	9 мг/мышь	15-20	600	>>		Сперматиды Остальные стадии	Защита Нет эффекта
	5 мг/мышь	10-15	100	Хромосомные перестройки		сперматоциты	защита
			200	То же		>>	усиление
	0,3 мг/г	10-15	400	ДЛМ		>>	защита
						Остальные стадии	Нет эффекта
Крысы	Не указана	—	600	>>		—	То же
Кролики	0,1-0,001%	30	800	>>		спермии	>>
АЭМ
Мыши	0,25 мг/г	30	500		ДЛМ	—	Нет эффекта
Цестеамин
Дрозофила	0,25 	15	2400		РЛМ	—	То же
					ДЛМ	—	>>
	0,4 и 1 	—	2000		РЛМ	сперматиды	усиление
						Остальные стадии	Нет эффекта
					Транслокации	Все стадии	То же
					делеции	сператиды	усиление
						прочие	Нет эффекта
					Потеря Х- и Y-хромосом	сперматоциты	усиление
						Остальные стадии	Нет эффекта
					ДЛМ	постмейотические	усиление
						предмейотические	Нет эффекта
	0,5 		1500		РЛМ	Все стадии	То же
	1,5 %		1000		РЛМ	То же	>>
	0,25 	—	2000		>>	постмейотические	>>
					транслокации	>>	>>
Тутовый шелкопряд	0,01 %	0	4215		ДЛМ	—	>>
			8430		видимые		>>
Мыши	4 мг/мышь	4-7	500		ДЛМ	Все стадии	>>
	4 мг/мышь	15	600		>>	—	защита
	150 мг/мышь	10	200		хромосомные	Сперматоциты	>>
			400		перестройки		>>
			600				>>
Крысы	Не указана	—	600		ДЛМ	—	Нет эффекта
Кролики	0,1-0,001%	5	800		>>	спермии	То же
Обезьяны	100 мг/кг	10	200		Хромосомные перестройки	сперматоциты	защита
Цистеин
Дрозофила	5 %	5-10	3000		РЛМ	—	Нет эффекта
	0,05-0,1мл	5-10	3600		>>	—	То же
Тутовый шелкопряд	0,01 %	0	4215		ДЛМ	—	>>
			8430		видимые	—	>>
Мыши	9 мг/мышь	15-20	600		ДЛМ	—	защита

Цистамин
>>	150 мг/кг	10-15	100	>>	Постсперматогониальные стадии	Слабое усиление
			300	>>	То же	Защита на 17,5%
			600	>>	>>	Нет эффекта
			100	транслокации	сперматогонии	То же
			300	>>	>>	>>
			600	>>	>>	>>
	50 мг/кг	15	300	>>	геноциты	защита
Цистафос
>>	0,3 мг/г	10-15	400	ДЛМ	Все стадии	Нет эффекта
Глутатион
Дрозофила	2.5 		2000	РЛМ транслокации	То же	То же
				Потеря Х- и Y-хромосом	сперматоциты	усиление
					Остальные стадии	Нет эффекта
				ДЛМ	сперматиды	усиление
					Остальные стадии	Нет эффекта
	2,5 	—	2000	РЛМ	постмейотические	защита
				транслокации	>>	Нет эффекта

Таблица 2.2 Влияние аминов на мутагенный эффект облучения

Объект исследования	Концентрация	Время введения вещества до облучения, мин	Доза облучения, Р	Исследованные тесты	Стадии сперматогенеза	Полученный результат
Серотонин
Дрозофила	1% (по 1 мл)	—	3000	РЛМ	—	усиление
	1% (по 1 мл)	—	3000	>>	—	>>
	0,5 %	—	1000	>>	Все стадии	Нет эффекта
Мегафен (аминозин)
>>	0,5 %	10-90	1500	>>	То же	То же
			2000	>>	>>	>>
			3000	>>	>>	>>
5-метокситриптамин (мексамин)
>>	0,25 %	—	1000	>>	Все стадии	>>
Мыши	0,08 мг/г	10-15	400	ДЛМ	сперматиды	защита
				>>	Остальные стадии	Нет эффекта
			600	>>	сперматоциты	защита
				>>	Остальные стадии	Нет эффекта
			200	>>	Все стадии	То же

Таблица2.3 Влияние антибиотиков на мутагенный эффект облучения

Объект исследования	Концентрация	Время введения вещества до облучения, мин	Доза облучения, Р	Исследованные тесты	Стадии сперматогенеза	Полученный результат
Актиномицин Д
Дроофилы	10-3 М	—	3000	РЛМ	—	Защита
	5*10-4 М	25	1000	летали	спермии	усиление
				В кольцевой Х-хромосоме	сперматиды	защита
	1 мг/мл	360	600	РЛМ	>>	>>
					сперматоциты	>>
					Остальные стадии	Нет эффекта
	0,1 мг/мл	—	2000	Потери Х-хромосом	Все стадии	усиление
				Нерахождение Х-хромосом	Все стадии	усиление
Дрозофила	10 мг/мл	—	2000	ДЛМ	спермии	>>
Мыши	1,75 мг/кг	30-40	200	/TD td P> Сперматоциты	>> адитивность
				Мутации специфических локусов	сперматогонии	усиление
Пенициллин
Дрозофила	104-8*104 ед/мл	—	3000	РЛМ	Все стадии	Защита
	0,1%(по 0,1мл)	30	1000	>>	сперматиды	>>
					Остальные стадии	Нет эффекта
	2*104 ед/мл	—	500	>>	спермии	защита
			1000
			2000
			3000
Митомицин С
>>	100 	—	600	>>	сперматиды	>>
					сперматоциты	>>
					сперматогонии	усиление
					Остальные стадии	Нет эффекта
	100 мкг/мл	До и после	500 - 4000	Видимые в 12 лакусах	постмейотические
				частичные	­	защита
				полные		Нет эффекта
Стрептомицин
>>	0,1 % (по 0,1мл)	30	1000	>>	сперматиды	То же >>
	5*104 /мл	—	1000	>>	все стадии	>>
			3000	>>	То же	>>
Мыши	0,5 мг/мышь	480	150	хромосомные перестройки	сперматоциты	защита
	1,0 мг/мышь	480		То же	>>	>>
	3,0 мг/мышь	480		>>	>>	Нет эффекта
	5,0 мг/мышь	480		>>	>>	То же
Хлорамфеникол
Дрозофила	0,04 мг/мл	90	1200	РЛМ	спермии	усиление
					сперматиды	защита
	0,25%(по 0.1мл)	30	1000	>>	>> остальные стадии	>> нет эффекта
Мыши	1,5 г/кг	240	600	ДЛМ	спермии	усиление
					сперматиды	Нет эффекта
2,4-динитрофенол
Дрозофила	0,05 %	10	1000	РЛМ	сперматоциты	защита
	0,003 %		1000	транслокации	>>	>>
	0,05		1000	ДЛМ	>>	>>
	0,5 мг/мл	240	1000	>>	Ранние стадии	Нет эффекта
	0,5 мг/мл			РЛМ	спермии	То же
					Сперматиды	Защита
	0,15 мкг/муху	0			спермии	>>
					Остальные стадии	Нет эффекта
	0,30 мкг/муху	0	1000	>>	спермии	защита
					сперматиды	>>
					сперматоциты	>>
					сперматогонии	Нет эффекта
	0,45 мкг/муху				Все стадии	То же

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

Барабой Л. М. - «Ионизирующая радиация» - М. 1991г.

Бударков С. Г. – «Радиобиологический справочник» – М. 1992г.

«Проблемы радиобиологии» – 1990г.

Моссе И. Б. – «Радиация и наследственность: генетические аспекты противорадиационной защиты» - Минск 1990г.

Ярмоненко С. П., Коноплянников А. Г., Вайнсон А. А. – «Клиническая радиобиология» – М. 1992г.

«Радиобиология» т. 38 – 1998г.

«Радиобиология» т. 39 – 1999г