Основные принципы диагностики маститов

3. Основные принципы диагностики маститов

По клиническим признакам

Диагностика клинических форм мастита является многосторонней. Для определения времени, характера и причины заболевания молочной железы необходимо собрать анамнез, провести клинический осмотр животного, его молочной железы и проверить качество молока.

Главная цель анализа анамнестических данных — установить начало патологического процесса, проявление первых признаков заболевания и предполагаемую его причину. Для этого в ходе сведений определяют условия содержания и кормления способ их доения, выясняют, как часто регистрируются маститы в хозяйстве и акушерско-гинекологическую ситуацию, а также ту желудочно-кишечных заболеваний.

После сбора и анализа анамнестических сведений приступают к клиническому исследованию, являющемуся основным методом определения статуса больного животного и диагностики маститов, протекающих в клинической форме.

Клиническое исследование необходимо проводить детально и полно, так как мастит часто бывает симптомом какого-то процесса, без устранения которого трудно ликвидировать процесс в вымени. Первостепенное значение имеют осмотр, пальпация, пробное доение, органолептическое исследование секрета вымени и термометрия. Для этого определяют показатели температуры тела, пульса, дыхания, руминации, состояние сердечно-сосудистой системы, органов пищеварения и размножения, а также надвыменных лимфатических узлов и самой молочной железы. Тыльной поверхностью руки определяют температуру отдельных четвертей вымени, сопоставляя тепловые ощущения наружной поверхности правой передней четверти с температурой наружной поверхности левой передней четверти. Обычно задние четверти теплее передних, поэтому с ними сравнивать передние четверти нельзя.

При осмотре устанавливают цвет и целость кожи, степень и пропорциональность развития отдельных четвертей вымени, их возможную деформацию в связи с наличием патологического процесса, а также состояние поверхностных кровеносных и лимфатических: сосудов. Пальпацией уточняют данные, полученные инспекцией, и выявляют новые признаки и симптомы, которые не могли быть распознаны при осмотре. Этим методом устанавливают консистенцию и характер уплотнений тканей вымени, болевую и температурную реакцию молочной железы, состояние цистерны и соскового канала, их проходимость и частично характер содержимого вымени. Обычно кожа вымени эластична, легко собирается в складки. Ткани вымени прощупываются в виде упругих дольчатых участков, это хорошо проявляется после выдаивания, поэтому исследовать надо до и после доения.

Определяют состояние надвыменных лимфатических узлов, расположенных у основания задних четвертей, а иногда незначительно выше железистой ткани вымени. Прощупывание начинают с основания железы и продвигаются вверх.

В норме лимфатические узлы – упругой консистенции, подвижные, величиной с голубиное яйцо. Затем исследуют соски. Для этого указательным и большим пальцами руки захватывают основание соска, тянут его вниз, смещая пальцы к верхушке. Сосок раскатывают между пальцами; это помогает выявить патоморфологические изменения в стенке цистерны соска, соскового канала, а также наличие молочных камней. Путем пробного доения определяют тонус сфинктера соскового канала, его проходимость, толщину молочной струи, т.е. выявляют наличие нормальной проходимости, тугодойности или непроизвольного истечения молока – лакторрея. При любой форме мастита в большинстве случаев отмечают общее угнетение животного, понижение или отсутствие аппетита, учащение пульса и дыхания, повышение температуры тела. Температура вымени повышена. Надвыменные лимфатические узлы могут быть увеличены, уплотнены, болезненны неподвижны. Проводят пробное доение с учетом качества и количества молока.

Также производят оценку по продуктивности отдельных четвертей вымени.

По количеству секрета, полученного из симметричных четвертей, судят о степени гипогалактии.

При мастите удой молока из пораженной четверти уменьшается на 80—95%, а иногда надаивают только 1—2 столовые ложки при удое из остальных долей по 500—1000 мл.

Разная продуктивность отдельных четвертей вымени коров является показателем наличия какого-то патологического процесса в соответствующих четвертях или, что бывает значительно чаще, следствием уже прошедших болезней.

После удаления содержимого физиологических емкостей вымени проверяют, насколько молочная железа уменьшилась в объеме и как изменился в связи с этим тургор тканей соответствующих четвертей. Для уточнения диагноза иногда прибегают к лабораторному исследованию секрета вымени.

Выяснение наличия и особенностей течения болезней молочной железы у отдельных животных проводится, кроме клинического осмотра, в основном по результатам определения качественных изменений молока.

Пробы молока отправляют в ветеринарную лабораторию в течение 3-4 часов с момента взятия проб в специальных термосах-холодильниках, обеспечивающих его температуру не выше 8-10°С. Образцы молока исследуют на наличие возбудителей мастита, а также определяют чувствительность микрофлоры к антибиотикам.

На основании результатов лабораторной экспертизы молока ветеринарный врач ставит диагноз на мастит и намечает методы лечения в соответствии с чувствительностью к антибиотикам выделенной из секрета вымени микрофлоры.

Диагностика клинических маститов должна осуществляться ежедневно во время преддоильной обработки вымени и сдаивания первых струек молока в специальную кружку, с расположенной наверху черной пластинкой с отверстием для слива молока.

Для предотвращения экономических потерь, связанных с маститами, важно раннее выявление субклинических форм. Их диагностика основана на определении физико-химических, биологических изменений, увеличения в молоке соматических клеток (лейкоциты, эпителиальные клетки), которые обнаруживаются только лабораторными методами.

В мировой практике в течение многих лет для диагностики широко используют как калифорнийский маститный тест (КМТ), так и подсчет соматических клеток с помощью электронного счетчика типа «Фоссоматик».

В нашей стране разработаны специальные диагностические пробы, позволяющие улавливать скрытую форму мастита и, следовательно, выявлять больных животных в ранней стадии заболевания. При этом, согласно требований Ветеринарного законодательства, все поголовье лактирующих коров один раз в месяц подвергают обязательному диагностическому исследованию с помощью препаратов димастин, мастидин, а при положительных результатах дополнительно ставят пробу отстаивания. При необходимости проводят бактериологическое исследование.

Реакция молока с димастином или мастидином основана на выявлении в нем повышенного количества соматических клеток и изменения рН. Целесообразнее это мероприятие проводить во время контрольной дойки. Для исследования берется молоко, после доения наносится на молочно-контрольные пластинки (МКП-1 и МКП-2).

Молочно-контрольная пластинка (МКП-1) имеет четыре (по числу четвертей) полушаровые луночки с черно-белым окрашиванием и кольцевыми углублениями, соответствующими объему 1,0 и 2,5 мл молока. Контрастное дно луночек облегчает выявление в молоке белых хлопьев на черном или примеси крови — на белом фоне. Между одной парой луночек сделано отверстие для правильного определения четвертей при проведении исследования. При; взятии проб молока из вымени молочно-контрольную пластинку держат отверстием по направлению к голове животного, что позволяет легко определить, из какой четверти взято молоко.

Молочно-контрольная пластинка МКП-2 отличается от МКП-1 большим размером лунок цилиндрической формы с калибровочным центральным углублением на 1 мл и наличием щелей между лунками для одномоментного слива излишка молока путем наклона пластинки под углом 60-65°.

Для упрощения и облегчения технологии определения субклиническго форм мастита предлагается полуавтоматическое устройство, разработанное Д.Д. Логвиновым и А.Д. Логвиновым в 1990 г. Устройство для определения качества молока (УОКМ-1) состоит из молочно-контрольной пластинки с вмонтированным в нее капилярно-раздаточным устройством и емкости - ручки, которая соединена посредством патрубка с резьбой с МКП.

Перед началом работы в баллончике-ручке должно находиться не менее 3/4 объема избранного реактива. Проводится обмывание и обработка вымени.

При отборе проб из четвертей вымени в каждой лунке должны находиться от 2 до 5 г молока. Затем легким нажатием на стенку баллончика из капиллярного устройства выбрасывается 2-3 капли диагностикума, поступающего синхронно во все четыре лунки. Учет реакции любого индикатора производится согласно инструкции к соответствующему диагностикуму по цветовой гамме сдвига рН.

Проба с димастином

Для исследования готовят 5% раствор димастина на дистиллированной или прокипяченной теплой воде. В каждое углубление пластинки из соответствующей четверти вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл димастина из бутылки с пипеткой-автоматом. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой лунке в течение 10-15 секунд.

При использовании пластинки МКП-2 палочка не требуется, смешивание молока с реактивом производится путем горизонтального вращения пластинки. Реакция учитывается по густоте желе и цвету.

Учет реакции по вязкости желе:

- отрицательная реакция — однородная жидкость (-);

- сомнительная реакция - следы образования желе(±);

-положительная реакция — ясно видимый сгусток (от слабого до плотного), который можно выбросить из луночки палочкой (+).

На пластинке МКП-2 при:

- отрицательной реакции (-) образуется однородная смесь.

- Сомнительная реакция (±) - во время вращения пластинки на дне лунки заметны тонкие хлопья без образования сгустка.

- Положительная реакция (+) - отчетливое появление слабого или быстрообразующегося плотного сгустка.

Проба с 10% раствором мастидина. Для исследования коров на мастит по молоку из общего удоя применяют 10% раствор мастидина.

Техника постановки пробы на пластинках МКП-1 и МКП-2 и учет реакции по образованию желе проводят так же, как и при постановке с димастином.

Для определения пораженной четверти вымени от животных давших, положительную или сомнительную реакции с 10% раствором мастидина, отбирают пробы молока из каждой четверти и исследуют с 5% или 2% растворами мастидина или по пробе отстаивания.

Проба с 2% раствором мастидина. Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл 10% раствора прибавляют 400 мл дистиллированной воды или прокипяченной теплой воды.

Постановка пробы и учет реакции проводят по образованию сгустка и изменению цвета, как при исследовании молока с 10% раствором мастидина.

Образование сгустка является основным диагностическим признаком при исследовании молока по димастиновой и мастидиновой пробам, а изменение цвета служит ориентирующим признаком.

Показания реакций с димастином или мастидином не имеют самостоятельного значения для постановки диагноза на мастит, они в обязательном порядке должны подтвердиться пробой отстаивания.

Проба отстаивания

Ее проводят путем отбора секрета из четвертей вымени, которые реагировали положительно на димастиновый или мастидиновый тесты.

В конце доения в пробирку надаивают 10 мл молока и ставят ее на 16-18 часов в холодильник, чтобы оно не прокисло. На второй день учитывают результат. При этом обращают внимание на наличие осадка, количество и характер сливок и цвет молока.

Молоко здоровых коров имеет белый или слегка синеватый оттенок, осадка не образует. Молоко от больных маститом коров водянистое, сливки становятся тягучие, слизистые, хлопьевидные.

Основным диагностическим признаком при пробе отстаивания является осадок. Образование его в отстоявшемся молоке или наличие хлопьевидных, тягучих слизистых сливок указывает на положительную реакцию (Рис. 12). Такую корову считают больной маститом, ее изолируют от общего стада и подвергают лечению. Молоко из пораженной маститом доли выдаивают руками, собирают отдельно и уничтожают. Молоко из непораженных четвертей в каждом отдельном случае бракуют в соответствии с наставлением по применению того или иного метода лечения.

Проба Тромсдорфа — один из давно известных непрямых методов обнаружения повышенного количества клеток в молоке. Сущность ее заключается в осаждении повышенного содержания лейкоцитов и других клеточных элементов при центрифугировании 10 мл молока. Используют делительные пробирки с суженным нижним концом. После центрифугирования судят по объему осадка о наличии или отсутствии заболевания вымени.

В процессе дальнейших исследований было замечено, что при центрифугировании сырого молока не все соматические клетки выпадают в осадок, какая-то часть их остается в слое сливок. Поэтому при нагревании молока перед центрифугированием до температуры 60— 70 °С объем осадка увеличивается.

Проба Уайтсайда — довольно распространенный диагностический тест. Для постановки пробы используют 4 %-ный раствор едкого натра, который смешивают с молоком в соотношении 1:5. При наличии воспалительных процессов в вымени (положительная реакция) образуется густая тягучая масса с хлопьями. Для упрощения реакции и ускорения исследований обычно берут 0,1 мл щелочи и 0,5 мл молока.

Многие исследователи признают пробу Уайтсайда достаточно чувствительной и пригодной для выявления различных состояний вымени, при помощи которой можно обнаружить до 80 % и более коров, подозреваемых в заболевании маститом. При изучении механизма действия пробы Уайтсайда оказалось, что степень реакции ее зависит не только от количества лейкоцитов, но и содержания молочного жира и солей кальция в молоке.

В настоящее время более широко применяют быстрые маститные тесты из поверхностно-активных веществ, которые, по нашим и другим многочисленным данным, дают хорошие результаты при диагностике мастита, отражая количество соматических клеток в молоке. Одним из таких тестов является калифорнийская маститная проба (КМТ).

Действующим началом в ней являются поверхностно-активные вещества типа алкиларилсульфатов и алкиларилсульфонатов. Данная проба заключается в смешивании равных объемов молока и раствора реактива (3—5 %-ного). Ставят ее на специальных пластмассовых пластинках с четырьмя цилиндрическими углублениями. В углубления надаивают из каждой четверти вымени по 2 мл молока и добавляют такое же количество реактива из пластмассовой шприц-бутылки. Молоко с реактивом перемешивают круговыми движениями пластинки. При повышенном содержании клеток в молоке через 5—10 с образуется желеобразная масса (густота последней зависит от количества клеток). Реактив включает индикатор бромкрезоловый пурпурный, который одновременно показывает изменения рН молока. Положительная реакция по КМТ разграничивается на три степени: слабо положительная, четко положительная и сильно положительная.

По данным авторов КМТ и других исследователей, которые проверяли данный тест, результаты пробы соответствуют содержанию клеток в молоке.

Механизм действия калифорнийской маститной пробы заключается в том, что в реакцию с поверхностно-активным веществом вступают ядра клеток. При этом оболочка ядер разрушается, дезоксирибонуклеиновая кислота, содержащаяся в них, освобождается и придает молоку, смешанному с реактивом, вязкую консистенцию.

Определение щелочности молока с помощью индикаторов. Щелочность молока устанавливают путем добавления в него индикаторов, изменяющих окраску при рН 6,0—7,0. Нормальное молоко имеет рН близкую 6,5— 6,7, с отклонениями в пределах 6,3—6,9. Реакция молока при клинических формах воспаления вымени, в том числе и скрытых маститах, почти всегда щелочная и очень редко кислая.

Проба с индикаторными карточками. На карточке имеется четыре кружка, пропитанные обычно бромтимоловым синим. Для диагностики маститов на пятно индикаторной карточки выдаивают из каждого соска 1—2 капли молока и наблюдают за изменением их окраски в течение 10—15 секунд. Если кружок окрашивается в желтый или желто-зеленый цвет, молоко считается нормальным, если в сине-зеленый, зеленый или желто-зеленый, то можно предполагать наличие мастита.

Выявление сгустков казеина в молоке.В условиях производства при доении животных выявить хлопья и сгустки казеина в молоке очень трудно. Заметить их можно в тонком слое молока на дне чашки на стенке пробирки после взбалтывания, при процеживании молока через густое темное металлическое сито или марлю, окрашенную в темный цвет.

На крупных животноводческих фермах при обследовании большого количества животных удобнее пользоваться специальной кружкой или банкой, в съемную крышку которой вставлено темное сито. В такие кружки сдаивают первые струйки молока, контролируя тем самым состояние молочных желез.

Каталазная проба. В градуированную центрифужную пробирку наливают 9 мл молока и 1 мл 3%-ного раствора перекиси водорода, закрывают резиновой пробкой со вставленной в нее изогнутой стеклянной трубочкой, переворачивают вверх дном и оставляют на три часа при комнатной температуре. После этого отмечают количество выделившегося кислорода. При выделении 4 см³ и более кислорода реакцию считают положительной, от 3 до 4 — сомнительной, менее 3 см³— отрицательной.

Однако количество каталазы в молоке увеличивается не только при воспалении ткани вымени, но и в молоке здоровых коров (в первые 5 дней после отела, в период запуска и даже в середине лактационного периода). Каталазная проба становится резко положительной при наличии в молоке эритроцитов, что в большинстве случаев не является признаком мастита. Наконец, иногда каталазная проба дает положительную реакцию без заметного увеличения количества клеток в молоке.

Таким образом, по объему выделившегося кислорода трудно судить о количестве клеток в 1 мл молока и наличии лейкоцитов или эритроцитов. Методика каталазной пробы сложна, требует много времени, а поэтому неприменима в практических условиях.

Фёльген-проба на ДНК.

В пробирку к 2 мл молока добавляют 2 мл 2н HCl и ставят в водяную баню при температуре 60° на 24 минуты. Затем добавляют 4 мл реактива Шиффа и оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Появление интенсивно сиреневого цвета указывает на наличие ДНК (положительная реакция).

Титрация лизоцима М. Отсутствие лизоцима М не является прямым признаком воспаления молочной железы, но при наличии мастита лизоцим М в основном отсутствует. Поэтому титрация лизоцима М в молоке отдельных долей вымени служит дополнительным методом диагностики маститов.

Молоко исследуют на наличие и концентрацию лизоцима М путем чашечной титрации на агаре с луночками (по В. И. Мутовину).

В качестве питательной среды берут мясопептонный агар (МПА), рН которого 7,2. Наливают его в чашки Петри слоем 2,5—-3 мм. Затем среду подсушивают, выдерживая при температуре 2—6° в течение 18—24 часов, после чего используют для титрации в течение пяти дней при условии хранения в холодильнике.

Для получения фона при титрации лизоцима М используют культуру золотистого стафилококка штамм ВМ (ветка молочная). Получают его во Всесоюзном научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии.

Суточную бульонную культуру этого штамма разводят физиологическим раствором 1 : 10 000 и вносят по 0,25 мл в каждую чашку для титрации, тщательно распределяя по всей поверхности среды. После нанесения фона чашки оставляют при комнатной температуре на 30—40 минут, затем в агаровых пластинках стерильной тонкостенной стальной трубкой диаметром 10 мм делают луночки (кольца), В одной чашке Петри можно разместить 4—7 луночек. В каждую луночку вносят по 2 капли испытуемого молока, выдерживают 18 часов при комнатной температуре (22—23°) и 5—6 часов в термостате при 37°, а затем учитывают результаты титрации молока.

Обычный рост культуры фона непосредственно у луночки, в которую внесен испытуемый материал, обозначают знаком О, что означает отсутствие в исследуемом материале титруемых количеств лизоцима М.

Если рост культуры около луночек значительно слабее густоты культуры фона, находящейся в удалении от луночек, то такой результат обозначают термином ЗУР (зона угнетенного роста). При наличии зоны угнетенного роста диаметром более 14 мм перед знаком ЗУР отмечают величину диаметра зоны угнетенного роста. Если ЗУР имеет диаметр 14 мм и менее, то результат обозначают термином СЛ (следы).

При наличии в испытуемом молоке достаточных концентраций лизоцимов вокруг соответствующих луночек видны кольцеобразные зоны задержки роста (ЗЗР), свободные от колоний тесткультуры. Степень активности лизоцима М учитывают по величине диаметра (мм) кольца зоны задержки роста.

По данным первичного учета судят о бактериостатической активности лизоцима М. Для получения данных о бактерицидных свойствах лизоцима чашки для титрации после первичного учета вновь помещают в термостат при 37° до утра следующего дня, после чего учитывают бактерицидное действие лизоцима по величине диаметра оставшихся зон задержки роста.