Навигация
4.1.2. Оборудование и реактивы
- гемометр Сали,
- капиллярная пипетка от гемометра Сали,
- глазная пипетка,
- стеклянная палочка,
- часовое стекло,
- 0,1 н. раствор соляной кислоты,
- дистиллированная вода.
4.1.3. Ход определения и учет результатов В градуированную пипетку гемометра Сали до метки "2" глазной пипеткой наливают децинормальньгй раствор соляной кислоты. В капиллярную пипетку от гемометра Сали набирают кровь до метки 20 мкл и выдувают ее в раствор соляной кислоты. Полученную смесь перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 10 минут. По истечении этого времени в пробирку по каплям доливают дистиллированную воду и, перемешивая стеклянной палочкой, подбирают цвет рабочего раствора до совпадения с цветом жидкости в стандартных пробирках. Количество ге-моглобина отсчитывают по нижнему мениску рабочего раствора на градуированной пробирке (показатели в г % выражают в г/л), 1 г % равен 10 г/л.
4.2. Цианметгемоглобиновый фотометрический метод
4.2.1. Подготовка к исследованию.
Приготовление раствора Драбкина, на 1 л реактива берут:
Бикарбонат натрия - 1 г, красная кровяная соль
- 0,2 г, цианистый калий или натрий - 0,05 г, дистиллированная вода
-остальной объем.
4.2.2. Оборудование и реактивы:
- фотоэлектроколориметр (ФЭК) или спектротометр с зеленым светофильтром и кюветами толщиной 1 см;
- химические пробирки с пробками;
- капиллярная пипетка от гсмометра Сали объемом 20 мкл;
- градуированная пипетка на 5 мл;
- раствор Драбкина.
4 2.3. Ход определения и учет результатов.
Мерной пипеткой в пробирку наливают 5 мл трансформирующего раствора Драбкина. Пипеткой от гемометра Сали добавляют 20 мкл крови. Содержимое пробирки хорошо перемешивают и оставляют в холодильнике на 20 минут. По истечению этого времени рабочий и трансформирующий растворы наливают в кюветы и, используя зеленый светофильтр, проводят измерения на ФЭКе. Расчет концентрации гемоглобина (г/л) на основе данного определения проводят по формуле:
x=d540 x 367,1 г/л,
где: d 540 - показания ФЭК; 367,1 - коэффициент пересчета, учитывающий разведение крови, миллимолярный вес гемоглобина и другие показатели.
5. Определение гематокритной величины
Гематокритное число - это отношение объема эритроцитов к общему объему крови, выраженное в л/л (1 л/л равен 100 %).
5.1. Подготовка к исследованию.
Приготовление растворов антикоагулянта:
- раствор Геллера и Пауля:
- на 100 мл воды: щавелевокислый аммоний - ],2 г, щавелевокислый калий - 0,8 г;
- 5 % раствор трсхзамсщенного лимоннокислого натрия.
5.2. Оборудование и реактивы:
- микрокапилляры,
- центрифуга, при массовом отборе проб удобнее использовать спе циальную центрифугу МГЦ - 8,
- растворы антикоагулянтов: раствор гепарина 1000 ЕД/мл или 7,7 мг/мл, или раствор Геллера и Пауля, или 5% раствор лимоннокислого натрия.
5.3. Ход определения и учет результатов.
Микрокапилляры предварительно обрабатывают одним из растворов антикоагулянта. Можно несколько раз сполоснуть их раствором гепарина и высушить при комнатной температуре или же в капилляры насасывают на 1/10 часть раствора Геллера и Пауля и высушивают в сушильном шкафу при 60°С. В подготовленные таким образом капилляры набирают кровь. Конец капилляра закупоривают с помощью замазки и ставят центрифугировать до получения постоянного объема эритроцитов. Время цснтри4)угирования зависит от скорости вращения центрифуги. Достигают эффекта полного осаждения эритроцитов. Отсчет объема эритроцитов и плазмы производят при помощи миллиметровой линейки. Процентное отношение столба эритроцитов к высоте всего столба крови является гематокритной величиной, которое переводят в размерность л/л.
6. Определение белка в сыворотке крови
Содержание белка в сыворотке крови рыб служит экспресс - тестом для определения уровня физиологического состояния рыб при выращивании в современных рыбоводных хозяйствах. Концентрацию белка выражают в г % или в г/л; 1 г/л равен 10 г %.
6.1. Оборудование и реактивы:
- уленгутки или небольшие пробирки,
- штатив,
- центрифуга,
- рефрактометр,
- пастеровские пипетки,
- спирт.
6.2. Ход определения и учет результатов
2-3 мл крови, полученной одним из методов (см. п.2.), помещают в подготовленные уленгутки или небольшие пробирки. После этого кровь центрифугируют 5 минут при 3000 об./мин. В случае отсутствия центрифуги проводят отстаивание крови в холодильнике 30 - 45 минут. Полученная после центрифугирования или отстаивания сыворотка отсасывается чистой пастеровской пипеткой и несколько се капель помещают на пластинку рефрактометра. Регистрируют показатель преломления по его шкале. По таблице 1, приведенной ниже, определяют содержаниебелка в сыворотке крови. После каждого исследования обе поверхности призм протирают марлевым тампоном, смоченным в спирте.
7. Определение числа эритроцитов пробирочным методом в камере Горяева
Число эритроцитов (в млн. в 1 мкл) - важный показатель физиологического состояния рыб, который характеризует наличие анемии.
7.1. Подготовка к исследованию.
Приготовление раствора Хендрикса:
- сульфат натрия - 20 г, хлористый натрий - 5 г, цитрат натрия трехзамещенный - 3 г, ледяная уксусная кислота - 100 мл, вода дистиллированная до 1 ()()() мл.
7.2. Оборудование и реактивы;
- химические пробирки с пробками,
- градуированная пипетка на 5 мл,
- капиллярная пипетка от гемометра Сали,
- пастеровская пипетка,
- камера Горяева,
- микроскоп,
- раствор Хендрикса.
Похожие работы
... факторов они отличаются специфичностью взаимодействия с чужеродными агентами. Специфичность иммунных реакции определяется лимфоцитами и иммуноглобули-нами. Состояние специфического звена иммунной системы рыб важно знать при оценке иммунного статуса, определении потенциальных возможностей организма рыб противостоять воздействию агрессивных факторов среды и установлении характера влияния ...
... ревматизма обусловила значительное снижение заболеваемости — до 0Д8 на 1000 детского населения. В разработку проблемы детского ревматизма внесли большой вклад отечественные педиатры В. И. Молчанов, А. А. Кисель, М. А, Скворцов, А. Б. Воловик, В. П. Бисярина, А. В. Долгополова и др. Эпидемиология, Установлена связь между началом заболевания и перенесенной стрептококковой инфекцией, в основном в ...
... при данной патологии достигает 32‰ и превосходит общий показатель в 2 раза. Эта проблема чрезвычайно актуальна, так как обуславливает серьезные последствия. У большинства женщин, перенесших гестоз, формируется хроническая патология почек, гипертоническая болезнь и эндокринные нарушения. А дети от таких матерей, как правило, имеют нарушения физического и психоэмоционального развития, при этом ...
... (кормовые объекты), наличие в рационе значительных количеств промежуточных хозяев патогенных гельминтов способствует развитию определенных эндопаразитозов. Также играет роль возраст рыбы, видовой и количественный состав паразитов у молоди расширяется от продолжительности пребывания её в пресной воде. Так, например, у чавычи на третьем году жизни обнаружено 10 видов паразитов, у сеголеток – всего ...
0 комментариев