Bacillus spp

2.3 Bacillus spp

Все трудности, которые испытывают систематики в определении микроорганизмов, наиболее ярко проявляются в описании Bacillus.

Род Bacillus поделен на 48 видов, а виды условно поделены на две группы: 22 вида I группы признаны, а 26 видов II группы не получили общего признания. Д. Клаус и Д. Фритце, приводя краткую историю таксономии рода Bacillus, видят перспективу развития систематики не в описании фенотипических свойств бактерий, а в более стабильных характеристиках, таких, как хемотаксономические с применением электрофоретического анализа всех клеточных белков или набора ферментов.

Род Bacillus распознается по палочкообразной форме. Грамположительные бактерии, продуцирующие каталазу. Аэробные или факультативно анаэробные. В конце вегетативного роста образуют споры. По форме споры и набуханию спорангия их разделили на три группы.

Первая группа включает бактерии, продуцирующие овальную эндоспору, которая не вызывает набухания спорангия (B.thuringiensis).

Во второй группе образующиеся овальные эндоспоры вызывают набухание спорангия. (B.laterosporus). ).(Каменек Л.К.,Харина Н.И. 1982г)

В третьей группе бактерии образуют круглую спору с набуханием спорангия (B.sphaericus). Из p. Bacillus наиболее изучены энтомопатогенные бактерии B.thuringiensis, B.sphaericus, B.popilliae, B.laterosporus, B.cereus.

2.4 Молочная болезнь типа А (Bacillus popilliae)

B.popilliae вызывает «молочную болезнь типа А» у японского жука (Popilliae japonica). Бактерия выделена в 1939 г. в США из больных личинок японского жука. Название болезни связано с молочно-белой окраской инфицированных личинок жука. Под микроскопом спорангий B.popilliae напоминает след от ботинка, где помимо споры находятся белковые включения (в области «каблука»). Параспоральные включения не отделяются от спор, но их можно растворить в щелочи. Бактерия не культивируется на искусственных питательных средах, ее размножают только заражением личинок путем инъекции. В природе источником заражения является почва, которую личинки поглощают вместе с пищей. Погибшие зараженные личинки почти полностью разлагаются в течение 2-3 дней в почве, образуя очаги инфекции.

2.5 Молочная болезнь типа Б (Bacillus lentimorbus)

B. lentimorbus является возбудителем молочной болезни японского жука (Popilliae japonica) типа Б. Главные отличия возбудителя молочной болезни типа Б от типа А в том, что B.lentimorbus не имеет параспоральных включений. Механизм действия тот же, что и у B.popilliae, т.е. вегетативные клетки проникают в полость тела, где они быстро размножаются, разрушают определенные ткани и вскоре заполняют значительную часть полости. Эта стадия заражения носит название «септицемия» или «молочная болезнь». Но в случае этого заболевания молочная окраска личинок позднее переходит в коричневый цвет.

Так как B.popilliae и B.lentimorbus не размножаются на искусственных питательных средах, их идентификация затруднена. Многие исследователи считают, что B.lentimorbus должен быть идентифицирован как разновидность. Предложено разделить возбудителей молочной болезни на 4 типа: главное отличие типа А от Б осталось, т.е. А содержит параспоральные включения; Б — не содержит. (Гулий В.В.,Тепляков Т.В, Иванов Г.М 1981)

Глава 3. Характеристика и механизм действия бактерий Bacillus thuringiensis. Действие экзотоксинов и эндотоксинов

Производимые микробиологической промышленности бактериальные препараты против вредных насекомых имеют в своей основе Bacillus thuringiensis.

Характерной особенностью кристаллоносных бактерий является образование помимо эндоспор, параспоровых белков кристаллов, которые получили кристаллов название Дельта-эндотоксинов. Кроме кристаллов кристаллоносные бактерии могу вырабатывать по крайней мере 3 других вещества, токсичных для насекомы. К ним относятся альфа-, бета- и гамма-экзотоксины.

Эндоспоры

Образование споры происходит после интенсивного роста палочки —тела бактерии. Она формируется вблизи одного из концов тела и выходит наружу. У разных вариантов бактерий наблюдаются некоторые различия во времени образования спор после посева культуры. У вариантов тюрингиензис начинают появляться через 24 ч после посева на мясо-пептонном агаре.

При высокой влажности споры погибают при 100°С через 5...10 мин, при 110° С через 3...5 мин. К действию химических веществ споры более устойчивы, чем кристаллы. Штаммы бактерий, утратившие способность образовывать кристаллы, при введении в кишечник гусениц чувствительных насекомых не вызывали заболевания, и жизнеспособные споры проходили через кишечник не прорастая.(Вейзер Я.).

3.1 Дельта-эндотоксин, или параспоральный кристаллический эндотоксин

Образуется одновременно со спорой в противоположной части тела бактерии. Сначала он имеет форму бесформенного комочка, постепенно превращаясь в правильный восьмингранник. Остатки стенок клетки бактерии (спорангия) после созревания споры и кристалла подвергаются автолизу и оба образования освобождаются.

Кристаллы по химическому составу представляют белковое соединение, в состав которого входит 17,5% азота и почти или совсем не содержится фосфора. Известно 17....18 аминокислот, входящих в состав кристалла. Кристаллы слабо устойчивы к действию температуры. Прогревание при 80... 100° С в течение 30….40 мин разрушает его структуру и инактивирует токсические свойства. В связи с этим его часто называют термолабильный эндотоксин. Кристаллы нерастворимы в воде и некоторых органических растворителях, но теряют свою токсичность при обработке крепкими кислотами и спиртами и еще в большей степени — щелочами. Белок кристалла переходит в раствор при высокой щелочности среды. Для варианта тюрингиензис рН в этом случае составляет 11,8. (Бондаренко Н.В. 1978г)

В кишечнике восприимчивых насекомых реакция щелочная, но ниже показателя рН, необходимого для растворения кристалла. Так, в переднем и среднем отделах кишечника у тутового, непарного и кольчатого шелкопрядов, восприимчивых к действию кристаллического эндотоксина, рН составляет 8,9. Предполагают, что гидролиз кристаллов происходит под влиянием протеолитических ферментов. При этом что эндотоксин сам по себе не токсичен для насекомых и представляет собой протоксин, который под действием определенных протеаз желудочного сока превращается в токсическое вещество. Этими протеазами обладают не все насекомые, с чем и связана избирательность действия токсина. Свидетельствует то обстоятельство, что у гусениц восклицательной и озимой совок с уровнем рН более высоким (9,5-9,6) чем у указанных выше шелкопрядов, кристаллы растворяются в кишечной среде, а у капустной совки (рН 10,2) кристаллы не растворяются, в обоих случаях отравления гусениц не происходит.

Типичными симптомами действия кристаллического эндотоксина на восприимчивых насекомых является паралич кишечника, прекращение питания в течение первого часа после заглатывания токсина и развитие общего паралича, приводящего, например, гусениц капустной белянки к гибели в течение 48 ч.

Испытывая действие бактерий варианта галлерия, относящегося к V серотипу, не образующему термостабильного экзотоксина (бета-экзотоксина), на 88 видах насекомых из 8 отрядов разделили их на 4 группы, различающиеся по степени восприимчивости.

·  1-ая группа - чешуекрылые, обладающие высокой восприимчивостью и полностью погибавшие в лабораторном опыте. К ним относятся некоторые виды из сем, настоящих молей, молей-пестрянок, горностаевых молей, выемчатокрылых молей, листоверток, нимфалид и белянок.

·  2-ая группа - представители семейств чешуекрылых, гибель гусениц которых из здоровой популяции не превышала 40...70%. Они относятся к семейству огневок, коконопрядов, пядениц, хохлаток и медведиц.

·  3-я группа - практически невосприимчивые гусеницы совок (кроме совки-гаммы) и пилильщиков.

·  4-ая - паразитические перепончатокрылые, которые во взрослой фазе были устойчивыми к бактериям. Гибель их личинок зависела от срока обработки хозяина и фазы развития паразита и устойчивые — представители прямокрылых, равнокрылых, жесткокрылых.