Пути поступления, распределение и накопление соединений свинца и кадмия в организме животных
Токсикологическое действие свинец – и кадмийсодержащих соединений на организм животных
Патологоанатомические и морфологические изменения в органах и тканях животных при отравлении соединениями свинца и кадмия
Токсикологические методы исследования
Результаты исследований
Морфологические изменения в органах крыс при поступлении в организм мяса цыплят-бройлеров, содержащего свинец и кадмий
Навигация
Токсикологические методы исследования
Изучение оценки биологической безопасности продукции птицеводства на лабораторных животных
75617
знаков
2
таблицы
12
изображений
2.1 Токсикологические методы исследования
Для проведения анализов нами был выбран полярографический метод исследования. Данный метод в течение нескольких десятков лет находит широкое применение в различных лабораториях для определения соединений металлов в пищевых продуктах, в том числе и в аналитической токсикологии. Это объясняется тем, что для проведения анализа требуется значительное количество разбавленного раствора вещества. Данный метод в 1986 г. определен ГОСТ (26932-86 и 26933-86) как основной и является теперь единым для исследования пищевых продуктов и других биоматериалов на наличие в них соединений тяжелых металлов. Исследование органов и тканей на общее содержание свинца и кадмия проводили на полярографе ПЛС-1.
Анализы и исследования, проводимые с помощью полярографа, основаны на регистрации и последующей расшифровке полярограмм (вольт-амперных кривых), представляющих собой зависимость тока, проходящего через электролитическую ячейку от потенциала ртутно-капельного электрода.
Для обеспечения снятия полярограмм в удобном виде для последующей обработки в полярографе имеется возможность выбора различной степени демпфицирования. Запись полярограмм проводили на лабораторном компенсационном двухкоординатном самопишущем приборе. Электролитическая ячейка с раствором, в которой содержится способное восстанавливаться или окисляться на рабочем электроде анализируемое вещество, является нелинейным сопротивлением. Вольтамперная характеристика такой ячейки представляет собой характерную кривую, имеющую форму волны, которую называют полярограммой или полярографической волной.
Данный метод выгодно отличается от других способов анализа, поскольку он позволяет определить несколько токсикоэлементов в одной подготовленной пробе.
Метод определения кадмия и свинца основан на сухой минерализации (озолении) пробы с использованием в качестве вспомогательного средства азотной кислоты и количественном определении кадмия и свинца полярографированием в режиме переменного тока. Основной раствор кадмия готовили путем помещения 1 г. металлического кадмия в коническую колбу на 250 мл и растворяли при нагревании на электроплитке в 25 см разбавленной 1:1 азотной кислоты. Раствор выпаривали на электроплитке со слабым нагревом до объема 3 см3, приливали 15 мл хлористоводородной (соляной) кислоты плотностью 1,19г/см3 и вновь выпаривали до того же объема. Выпаривание повторяли еще два раза, добавляя 50 мл хлористоводородной кислоты. После охлаждения добавляли 50 мл хлористоводородной кислоты, количественно переносили раствор в мерную колбу на 1000 мл и доводили бидистилированной водой до метки. Раствор хранят не более 1 года. Концентрация кадмия в основном растворе равна 1мг/см3.
Стандартные растворы необходимой концентрации готовили последовательным разбавлением в 10, 100, и 1000 раз основного раствора кадмия хлористоводородной кислотой (0,1 мол/дм3).
Для приготовления основного раствора свинца использовали свинца нитрат, перекристаллзованый и высушенный при 104 °С до постоянной массы 1,599 г высушенной соли растворяли в небольшом количестве бидистиллированной воды и количественно переносили в мерную колбу вместимостью 1000 мл. В колбу добавляли 5см3 азотной кислоты плотностью 1,4 г/см3 и доводили объем до метки бидистиллированной водой. Раствор хранят не более 1 года. Концентрация свинца в основном растворе равна 1мг/см3 .
Стандартные растворы необходимой концентрации готовили последовательным разбавлением в 10, 100 и 1000 раз основного раствора свинца хлористоводородной кислотой (0,1 мол/дм3). В ходе исследований проверяли каждую новую партию реактивов.
Контрольные растворы готовили, используя все реактивы и растворы, аналогично приготовлению испытуемого раствора. Если контрольный раствор содержит измеримое количество кадмия или свинца, его готовят при каждой серии измерении.
Для подготовки капилляра электрода, последний помещают в стакан хлористоводородной кислоты (мол/дм3) и проводят сначала накопление в течении 60 с, затем растворение при максимальной скорости развертки (10,0—
10,5 в/с). Процедуру электрохимической очистки повторяют еще 2 раза. Ячейку многократно промывают бидистилированной водой.
Приготовление испытуемого раствора проводили растворением золы, полученной при минерализации в тигле при нагревании на электроплитке с 5 мл разбавленной (1:1) хлористоводородной кислоты. В последующем раствор выпаривали до объема около 1мл, а затем досуха в водяной бане. Осадок растворяли в 15 мл раствора хлористоводородной кислоты. В последующем раствор выпаривали до объема около 1 мл, а затем досуха на водяной бане. Осадок растворяли в 15 мл раствора хлористоводородной кислоты (0,1 моль/дм3) и количественно переносили в стакан электролизера, смывая тигель 5 мл той же кислоты. Для минерализации (озоления) продукты помещали на электроплитку ипроводили обугливание до прекращения выделения дыма, затем тигельпомещали в электропечь при температуре 250°С .
Минерализацию проб проводили постепенно, повышая температуру электропечи на 50°С через каждые 30 мин, и доводя ее до 400°С продолжая минерализацию в этих условиях до получения серой золы.
После изъятия тигля с золой из электропечи последний охлаждали до комнатной температуры, и серую золу смачивали 0,5-1,0 см3 раствора азотной кислоты. Затем кислоту досуха выпаривали на электроплитке со слабым нагревом и снова помещали тигель с пробой в электропечь при температуре 250°С, постепенно доводя температуру до 450°С, и выдерживали 1 час. Минерализация считается законченной, когда зола станет белого или слегка окрашенного цвета, без обугленных частиц.
При наличии обугленных частиц повторяют обработку золы раствором азотной кислоты.
Лабораторную стеклянную посуду промывали хромовой смесью, водой, азотной кислотой, дважды бидистилированной водой и высушивали. Затем промывали раствором дитизона 0,01 г/дм³ и хлороформом и высушивали на воздухе в вытяжном шкафу.
Измерения проводили на полярографе в режиме переменного тока с ртутно-капельным электродом в электролизере вместимостью 5см3. Полярограмму записывали при напряжении от -0,6 до -1,0 относительно донной ртути, выбирая режим работы в соответствии с инструкцией к полярографу.
Прямое полярографирование использовали в тех случаях, когда массовая доля кадмия или свинца в пробе обеспечивает получение четкого пика металла в полярограмме, а состав элементов в золе не создает помех. Для этой цели в две конические колбы вместимостью 10 или 25 см3 помещали 4 см3 контрольного или испытуемого раствора. В первую колбу добавляли 1 см3 соответствующего фонового электролита и пропускали через раствор азот или другой инертный газ в течение 10 минут. Затем раствор немедленно переносили в электролизер, предварительно промытый дистиллированной водой, фоновым электролитом и полярографируемым раствором, полярографировали и измеряли высоту пика токсикоэлемента .
Во вторую колбу вносили добавку - стандартный размер в таком количестве, чтобы высота пика токсикоэлемента на полярограмме, примерно удвоилась, по сравнению с первоначальной. Добавку следует вносить в малом объеме (не более 1 см3 ), чтобы предотвратить изменение концентрации фонового электролита и зольных элементов. Затем в колбу добавляли фоновый электролит в объеме, необходимом для доведения его до 5см3. Пропускали инертный газ, полярографировали в тех же условиях и измеряли высоту пика токсикоэлемента.
Полярографирование с предварительным внесением токсикоэлемента в испытуемый раствор проводили при анализе образцов с низкой массовой долей токсикоэлементов или в тех случаях, когда на полярограмме вследствие помех из-за сложного элементарного состава золы наблюдался только нечеткий изгиб в области пика токсикоэлемента. Для определения в две конические колбы вместимостью 10 или 25 см помещали по 4 см контрольного или испытуемого раствора и добавляли минимальное количество токсикоэлемента (0,2-0,5 мкг), которое обеспечило бы получение на полярограмме четкого пика кадмия или свинца.
Далее поступали так же, как и при прямом полярографировании. Массовую долю токсикоэлемента (X) в мг/кг или массовую концентрацию (X) в мг/дм вычисляли по высоте пиков, измеренных на полярограмме с помощью линейки с погрешностью до 1 мм, соответственно по формулам:
- при прямом полярографировании:
- при полярографировании с предварительным внесением токсикоэлемента:
где Н1 - высота пика, полученного при первом полярографировании, мм;
Н2 - высота пика, полученного при втором полярографировании, мм;
V2 - объем испытуемого раствора после внесения добавки, см;
V1- объем испытуемого раствора, приготовленного из озоленной навески, см;
М - масса навески продукта, взятая для озоления, г;
V - объем продукта, взятый для озоления, см;
Хк - масса свинца или кадмия в контрольном растворе, мкг;
M1 - масса токсикоэлемента, добавленная перед вторым полярографированием, мкг; М2 - масса токсикоэлемента, предварительно добавленная для получения четкого пика токсикоэлемента, мкг Мк – масса токсикоэлемента в контрольном растворе, мкг.
2.2 Гистологические методы исследования
Кусочки органов размером 0,5х0,5 см фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина в течение 48 часов при комнатной температуре. Срезы изготавливали на санном микротом толщиной 5-7мкм. Окраску срезов проводили гематоксилином Эрлиха с последующее докраской 1 % раствором эозина и судана III на жир. Окрашенные срезы заключали в полистирол. Изучение срезов проводили под световым микроскопом при увеличении в 400 раз
Похожие работы
... состав мух птицехозяйств г. Семипалатинска, установить наиболее приемлемого в экологическом и биологическом отношении вида для использования как продуцента биомассы личинок используемого в качестве кормового белка. Сборы фаунистического материала и экологические наблюдения зоофильных мух проведены на территориях птицефабрик и малых птицехозяйств (ТОО КАСКЕ) Семипалатинского Прииртышья в период с ...
... как яйцо продаётся уже предварительно обработанное дез.растворами и облученное ультрафиолетовыми лучами непосредственно на предприятии - поставщике яиц. 2.3 Технология инкубирования яиц Операции в инкубаторе выполняются в такой последовательности: · приемка, оценка и отбор пригодных для инкубации яиц; · в племенной работе к этим операциям прибавляется разбор яиц по линиям; · породам и ...
... проекта достигает значения, большего 1. 3. Средняя норма рентабельности проекта (средняя за период реализации проекта чистая бухгалтерская прибыль в сопоставлении со средними инвестициями) – 64,16%. Использование только данного показателя не позволяет обосновать экономическую эффективность проекта. 4. Внутренняя норма рентабельности (ставка доходности или дисконтирования, при которой чистый ...
... показатель выводимости яиц, вывода молодняка. 1.8 Инкубаторий и основные типы инкубаторов Все проводимые в инкубатории операции можно объединить в три группы: приемка и обработка яиц, инкубация яиц, вывод и обработка молодняка. Производственные помещения инкубатория должны быть изолированы друг от друга, в них необходимо поддерживать определенные параметры микроклимата. Перед началом ...
0 комментариев