Другие микроорганизмы дифференцируют от лептоспир по форме и характеру движения, и все они, кроме того, преломляют свет и кажутся блестящими

1.7.7. Другие микроорганизмы дифференцируют от лептоспир по форме и характеру движения, и все они, кроме того, преломляют свет и кажутся блестящими.

1.8. Выделение культур лептоспир

1.8.1. Выделение лептоспир из крови при жизни возможно в первые 5–7 дней болезни в период лихорадки. Для этой цели кровь из яремной или ушной вены вносят через стерильную иглу по 3–5 капель в 5–7 пробирок с питательной средой или высевают из пробы крови, присланной в лабораторию (приложения 2 и 3).

1.8.2. От трупа при диагностическом убое высевают пастеровской пипеткой кровь из сердца, ткани печени и почки, а от абортированного плода, кроме того, и из содержимого желудка. При убое клинически здоровых животных высевы делают из почки и мочевого пузыря. Из каждого органа засевают 3–5 пробирок с питательной средой.

1.8.3. Для выделения культур из почки ее освобождают от капсулы, поверхность прижигают шпателем или горящим спиртовым тампоном, пипетку вводят параллельно поверхности в корковый слой. Высев делают у крупного рогатого скота из 2–3 долей почки, у свиней– из нескольких участков почки.

1.8.4. Высевы из других органов делают по общепринятой методике.

Мочу, ликвор, околосердечный, брюшной транссудат и другие жидкие биосубстраты засевают по 1–3 капли в 3–5 пробирок с питательной средой.

1.8.5. Посевы культивируют при температуре 28 – 30° в течение трех месяцев. Лептоспиры, размножаясь в питательной среде, не изменяют ее внешнего вида. Поэтому для выявления роста лептоспир через 3, 5, 7, 10 и далее каждые 5 дней культивирования из всех пробирок микроскопируют капли, которые наносят на предметное стекло бактериологической петлей. Большинство культур вырастает через 7–20 дней. Иногда лептоспиры обнаруживают в среде на 3–5-й день, через 1–2 месяца и очень редко через 2–3 месяца культивирования.

Содержимое Каждой пробирки, в которой обнаружены лептоспиры, пересевают в 3–5 пробирок со свежей питательной средой. Пробирки с обильным ростом посторонней микрофлоры уничтожают.

1.9. Порядок сохранения культур

1.9.1. Пересевы культур лептоспир производят пастеровскими пипетками. В пробирку с 5–10 мл питательной среды вносят 0,5–1,0 мл культуры. Максимальное накопление лептоспир наблюдается через 4–7 дней культивирования при температуре 28–30°.

1.9.2. Рост и чистоту культуры лептоспир в жидких питательных средах контролируют микроскопически в темном поле микроскопа и макроскопически – просмотром пробирок с культурами в луче света от осветителя. При этом после встряхивания в питательной среде четко просматриваются муаровые волны, образуемые выросшей культурой.

Культуру лептоспир пересевают через каждые 10–15 дней не менее чем в 3–4 пробирки.

1.9.3. Штаммы лептоопир, постоянно поддерживаемые б лаборатории, можно хранить в пробирках под вазелиновым маслом, в запаянных ампулах, в морозильной камере при –70–80 °С или при температуре жидкого азота (–190 °С). Лептоспиры консервируют любым из этих методов после выращивания в сывороточной среде до максимального накопления.

В пробирку на культуру наслаивают 1 – 1,5 мл стерильного вазелинового масла или культуру расфасовывают в стерильные 1–5 мл ампулы из нейтрального стекла и запаивают.

Хранят пробирки и ампулы в темном месте при комнатной температуре. В таких условиях лептоспиры можно хранить без пересевов в течение трех месяцев.

1.9.4. Для хранения в замороженном состоянии культуры расфасовывают в ампулы, запаивают, охлаждают до 0–4 °С и помещают в сосуды Дьюара, заполненные азотом, или морозильную камеру.

В жидком азоте лептоспиры можно хранить без пересевов в течение года, при этом они заметно не изменяют своих биологических свойств.

1.10. Очистка загрязненных культур лептоспир

1.10.1. Культуры лептоспир, загрязненные микрофлорой, очищают биологическим методом, фильтрацией через бактерийные фильтры или пересевом на плотные питательные среды.

1.10.2. Для очистки биологическим методом загрязненную культуру вводят внутрибрюшинно морским свинкам в дозе 1–2 мл, крольчонку – 1–2 мл, хомяку или мыши – 0,5 мл. Через 30–60 минут кровь из сердца зараженного животного высевают в пробирки с питательной средой.

1.10.3. Лептоспиры проходят через асбестовые фильтровальные пластины марки СФ и свечи Шимберляна Л-5. Для очистки методом фильтрации загрязненную культуру фильтруют через простерилизованный фильтр. Фильтрат рассеивают в 5–10 пробирок с питательной средой. В высевах из фильтрата получают чистую культуру лептоспир.

1.11. Постановка биологической пробы

1.11.1. Восприимчивы к лептоспирозу при экспериментальном заражении золотистые хомяки, крольчата, морские свинки, крапчатые суслики, щенки собак, котята, белые и серые мыши.

Для повседневной практической работы используют золотистых хомяков 20–30-дневного возраста и крольчат-сосунов в возрасте 10–20 дней.

Молодые свинки (3–5-недельного возраста) весом 150–200 г. наиболее чувствительны к L. icterohaemorrhagiae, в меньшей степени – к L. pomona и мало чувствительны к лептоспирам других серологических групп.

1.11.2. Лабораторных животных заражают для выделения культур лептоспир из патологического материала и объектов внешней среды, очистки культур лептоспир от посторонней микрофлоры, определения вирулентности выделенных культур и дифференциации от сапрофитов.

1.11.3. Для выделения культур лептоспир животных заражают кровью, мочой, суспензией из паренхиматозных органов животных (абортированного плода) или спермой.

Исследуемый материал вводят подкожно или внутрибрюшинно хомякам от 0,3–0,5 до 1 мл, крольчатам – 2–3 мл.

1.11.4. На каждую пробу исследуемого материала необходимо брать по два зверька: одного из них убивают на 4–5-й, другого, если он не погибает, на 14–16-й день после заражения. Кровь зверька, убитого на 14–16-й день после заражения, исследуют по реакции микроагглютинации, начиная с разведения 1:10 с лептоспира-ми 13 серологических групп. Положительная РМА свидетельствует о наличии лептоспйр в исследуемом материале.

1.11.5. Высевы от убитых и павших зверьков делают из сердца, печени и почки в 2–3 пробирки из каждого органа. Вторую почку, кусочки печени, транссудат из грудной и брюшной полостей, околосердечную жидкость и содержимое мочевого пузыря микроскопируют.

1.11.6. Культуры лептоспир чаще удается выделить из органов зверька в период проявления клинических признаков болезни, проявляющихся отказом от корма, вялостью, дрожью, взъерошенностью шерсти, конъюнктивитом, желтушностью видимых слизистых оболочек и т.д.

1.11.7. У крольчат и морских свинок проводят после заражения термометрию. У крольчат нормальной температурой считается 38,5–39,5 °С, у свинок – 38–39,5 °С. В период лихорадки кровь берут из уха или сердца шприцем для микроскопии и посева.

1.11.8. Патогенность и вирулентность выделенных культур лептоспир проверяют на золотистых хомяках или крольчатах. Патогенные лептоспиры способны размножаться в организме животного, вызывать клинические проявления болезни, характерные патологоанатомические изменения и гибель животного. Лептоспиры-сапрофиты такими свойствами не обладают. Заражение животных проводят внутрибрюшинно 5–7-дневной культурой, содержащей 70–100 лептоспир в поле зрения микроскопа. Культуры лептоспир, убивающие золотистых хомяков на 5–12-й день дозой менее 0,1 мл, считают высоковирулентными, 0,2–0,4 мл – средней вирулентности и 0,5–1 мл – слабовирулентными.

1.11.9. Определение серогрупповой принадлежности культур лептоспир проводят в соответствии с Наставлением по применению групповых агглютинирующих лептоспирозных сывороток, утвержденным Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 31 мая 1974 г.

1.11.10. В качестве биологической модели для обнаружения лептоспир могут быть использованы взрослые кролики и морские свинки. Кровь животных исследуют по РМА на наличие специфических антител. Животных, в крови которых не обнаружены специфические антитела, заражают исследуемым материалом.

Кровь зараженных животных исследуют три раза через каждые семь дней по реакции микроагглютинации начиная с разведения 1: 10 с лептоспирами 13 серологических групп. Обнаружение в крови зараженных животных специфических антител свидетельствует о наличии лептоспир в исследуемом материале и позволяет ориентировочно судить о их серогрупповой принадлежности.

Похожие работы

Лептоспиры. Лабораторная диагностика лептоспироза

Скачать

75057

0

1

... описанных ниже вариантов теста. 1. РАЛ Со времени разработки Мартином и Петтитом в 1918 г. этот тест остается «золотым стандартом» серологической диагностики лептоспироза (ПРЛ 10:3.1). Для получения антигена для РАЛ используют 7–10-дневные культуры лептоспир, выращенные на жидких питательных средах и имеющие пышный рост (не менее 50 лептоспир в поле зрения без спонтанной агглютинации и примесей ...

Сущность лептоспироза

Скачать

28892

0

0

... - зернистая и жировая дистрофия. В почках - некротические изменения в эпителии почечных канальцев. В легких - геморрагические инфаркты. 8. Диагностика Диагноз на лептоспироз подтверждается результатами бактериологического, серологического и гистологического исследований с обязательным учетом эпизоотологических, эпидемиологических, клинических и патологоанатомических данных. Благополучным по ...

Зоогигиена с основами проектирования животноводческих объектов

Скачать

59573

0

3

... между печью и кожухом вводят наружный воздух, который согревается о зеркало печи, поднимается кверху и там через отверстия в кожухе выходит в помещение. Если при проектировании животноводческих построек детальный теплотехнический и вентиляционный расчет покажет, что выделяемого животными тепла недостаточно для поддержания в холодное время года гигиенического температурно-влажностного режима ...

Эпизоотология

Скачать

251187

1

0

... через 13, перманганат калия 1 : 1000 через 10 мин. Микроб очень чувствителен к антибиотикам тетрациклинового ряда, в меньшей степени — к пенициллину и синтомицину, устойчив к мицелину и колимицину. Эпизоотология. В естественных условиях болеют овцы незави­симо от возраста, пола и породности. Из лабораторных животных чувствительны кролики и белые мыши, менее восприимчивы морские свинки, голуби. ...