Особенности микробиологических исследований в гинекологии

Критерии оценки состояния вагинального микроценоза (исследование влагалищного содержимого на степень чистоты):

1.исключение ИППП

2.микроскопия вагинального мазка, окрашенного по Граму

3.посев вагинального отделяемого на факультативно – аэробную группу микроорганизмов и микроаэрофилы.

Окрашивание гинекологических мазков по модифицированному способу Грама (в соответствии с приказом №936 от 12.07.85 МЗ СССР).

Принцип: при обесцвечивании грамотрицательных микроорганизмов определенное время в этиловом спирте, отдают основной фиолетовый краситель и докрашиваются дополнительным оранжево – красным.

Реактивы:

1. 1% водный раствор кристаллвиолета: 1 г кристаллвиолета растворить в 100 мл кипящей дистиллированной воды, раствор фильтровать в горячем виде через бумажный фильтр.

2. водный раствор Люголя: 2 г йодистого калия растворить в 300 мл дистиллированной воды, в полученном растворе растворить 1 г чистого йода, фильтровать через бумажный фильтр

3. 96% этанол

4. 1% водный раствор нейтрального красного: 1 г нейтрального красного растворить в 100 млдистиллированной воды и фильтровать через бумажный фильтр.

Оборудование:

1.микроскоп

2.часы

3.штатив

Ход окраски:

1.фиксируют препарат 96% этанолом до высыхания

1.препарат покрыть полоской фильтровальной бумаги и заливают 1% водным раствором кристаллвиолета на1мин

2.через минуту снять фильтровашку, промыть препарат водопроводной водой и залить раствором Люголя на 10 сек до почернения мазка

3.смытьостаток люголевского раствора

4.обесцветитьпрепарат в 96% этаноле под контролем глаза поочередно погружая и вынимая препарат из спирта, находящегося в стаканчике. Обесцвечивают до прекращения стекания фиолетовых струек с тонких участков препарата.

5.промыть водопроводной водой

6.докрасить 1% раствором нейтрального красного в течение 3 минут

7.тщательно промыть под водопроводной водой, высушить и микроскопировать.

При правильной окраске препарат оранжево – красного цвета на тонких участках и лилово – фиолетового на толстых.Ядра клеток должны частично удерживать фиолетовую окраску, по периферии – оранжево – красный.

Преимущества метода:

1.быстрота установления диагноза (гонорея)

2.относительная простата установки

3.дешивизна

Недостатки метода:

1.субъективизм (опыт и квалификация лаборанта)

2.критичность взятия материала и приготовления мазков.

При микроскопии вагинального мазка, окрашенного по Граму оценивают:

1.состояние вагинального эпителия

2.лейкоцитарную реакцию

3.состав микрофлоры

При количественной характеристике микрофлоры используют критерии R.P. Nugent et al. Оценка общей микробной обсемененности вагинального отделяемого проводится по четырех балльной системе – по числу микробных клеток, обнаруживаемых в одном поле зрения при микроскопии с иммерсией:

+ до 10 микробных клеток в поле зрения, незначительное их количество (скудный рост)

++ от 11 до 100 – умеренное их количество

+++ от100 до 1000 – большое их количество

++++ более 1000 – массивное их количество

качественная оценка микрофлоры включает дифференциацию всех морфотипов по их тинкториальным и морфологическим признакам. Различают морфотипы лактобацилл, фузобактерий, бактероидов, мобилинкусов, лептотрихий, гарднереллы, также грамположительных кокков, дрожжеподобных грибов. В мазке могут быть обнаружены трихомонады и другие паразиты.

Микробиологические критерии оценки состояния микроценоза влагалища у женщин репродуктивного возраста (микроскопия мазков, окрашенных по Граму).

Нормоценоз:

1.вагинальный эпителий представлен клетками поверхностных слоев, реже встречаются клетки промежуточного слоя; «ключевых» клеток нет, иногда встречаются «ложноключевые» клетки

2.лейкоцетарная реакция отсутствует или слабо выражена- единичные лейкоциты в п/зр

3.общее количество микроорганизмов- умеренное или большое

4.доминирующий морфотип – лактобациллы, другие морфотипы отсутствуют, либо их количество исчисляется единичными микробными клетками в редких п/зр

Бактериальный вагиноз:

1.вагинальный эпителий представлен клетками поверхностных слоев, редко встречаются промежуточные клетки, часто – «ключевые» клетки

2.лейкоцитарная реакция как правило отсутствует

3.общееколичество микроорганизмов массивное, реже – большое

4.преобладают морфотипы строгих анаэробов и гарднереллы, лактоморфотипы отсутствуют или определяются как единичные не во всех п/зр

Вагинальный кандидоз: в зависимости от концентрации грибов в отделяемом влагалища и сопутствующей микрофлоры вагинального биотопа выделяют 3 формы инфекции влагалища грибами рода Candida

1.кандидозный вагинит:

1.вагинальный эпителий преимущественно поверхностных слоев, но может быть много промежуточных и даже парабазальных клеток (пропорционально тяжести течения клинического воспалительного процесса)2.лейкоцитарная реакция от умеренной (10 – 15 лейкоцитов в п/зр) до резко выраженной (30 – 50 и более)

3.общее количество микроорганизмов – умеренное или большое

4.доминирует морфотип лактобацилл, присутствуют дрожжевые клетки, фрагменты псевдомицелия с бластоспорами

2.сочетание бактериального вагиноза и кандидозного вагинита:

1.вагинальный эпителий преимущественно поверхностных слоев, могут встречаться промежуточные и парабазальные клетки; присутствуют «ключевые» клетки

2.умеренная или выраженная лейкоцитарная реакция

3.общее количество микроорганизмов – массивное, реже – большое

4.доминируют морфотипы строгих анаэробов и гарднереллы, присутствуют дрожжевые клетки и/или фрагменты псевдомицелия гриба

5.лактобациллы отсутствуют или выявляются единичные лактоморфотипы в п/зр

3.бессимптомное носительство грибов:

1.вагинальный эпителий представлен преимущественно клетками поверхностных слоев

2.лейкоцитарная реакция не выражена, единичные лейкоциты в п/зр

3.общее количество микроорганизмов – умеренное или большое

4.доминируют морфотипы лактобацилл, элементы дрожжеподобного гриба чаще всего не выявляются или обнаруживаются единичные дрожжевые клетки в редких полях зрения

Неспецифический вагинит:

1.вагинальный эпителий представлен клетками поверхностного и промежуточного слоев, при выраженном воспалительном процессе встречаются клетки парабазального слоя

2.лейкацетарная реакция – более 10 лейкоцитов в п/зр

3.общее количество микроорганизмов умеренное

4.лактобацилл нет или их количество резко снижено - до единичных в п/зр

5.преобладают морфотипы УПМ – колиформные палочки или грамположительные кокки

Цитолитический вагиноз:

1.эпителиальные клетки в подавляющем большинстве подвергнуты цитолизу, в мазке преобладают элементы деструкции клеток- детрит, обнаженные ядра промежуточных и поверхностных эпителиальных клеток

2.лейкоцитов нет или до 10 в п/зр

3.микрофлора вбольшом количестве, представлена морфотипом типичных лактобацилл

Промежуточный вариант микроценоза:

1.вагинальный эпителий представлен поверхностными клетками, могут встречаться единичные «ключевые» клетки или отмечена склонность к их формированию

2.лейкоцитов не более 10 в п/зр

3.общее количество микроорганизмов – умеренное или большое

4.доминируют морфотипы строгих анаэробов и гарднереллы в сочетании со сниженным титром морфотипов лактобацилл

Вагинальная атрофия:

1.в зависимости от степени атрофии слизистой влагалища эпителий представлен различным соотношением числа промежуточных и парабазальных клеток, по мере нарастания атрофии увеличивается число парабазальных и базальных клеток

2.лейкоцитовне более 10 в п/зр

3.микрофлора скудная, практически нет, могут встречаться единичные лактоморфотипы или морфотипы УПМ в редких п/зр.

Слэнг микроскопистов.

Ознакомьтесь с кратким словарем слэнга профессионалов от микроскопии. Этот «кулинарный» язык используется для обучения начинающих микроскопистов. Эти словосочетания как мостики связывают макро – и микромиры.

1.кофейные зерна – гонококки относятся к парным коккам, по форме сходны с кофейными зернами

2.семечка или миндаль – трихомонада, ее ядро похоже на семечку подсолнуха или косточку миндаля

3.булочка с изюмом – гонорея. Булочка – лейкоцит, изюм – гонококк.

4.шашлык – грибы. Клетки плоского эпителия могут слипаться пластами, столбиками, а псевдомицелий гриба Candida cловно «прошивает» их, как шашлык.

5.ягода (голубика) – грибы. Споры организовываются в кучку, словно рассыпалась горсть ягод

6.крылья чайки – мобилинкус имеет форму тонких, изогнутых палочек с заостренными концами, располагается одиночно или парами («крылья чайки»)

7.бактериальный песок – при бактериальном вагинозе флора может располагаться по периметру эпителия словно песок.

8.месяц – бациллы мобилинкус слабоокрашенные грамотрицательные изогнутые палочки с заостренными в форме полумесяца краями

9.пчелиный рой – гонорея, диплококк часто ложиться на эпителиальные клетки плотными кучками.

10.тутовая ягода – вирус простого герпеса. В мазках содержимого везикул (пузырей) обнаруживаются многоядерные гигантские клетки с измененными ядрами по типу «тутовой ягоды».

11.спагетти – лептотрикс.

12.помидоры в банке –герпетическая инфекция. Плотное соседство ядер в многоядерной клетке при герпетической инфекции, как консервированные помидоры плотно расположенные в банке.