Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита
Процессы свободно-радикального окисления липидов в развитии и течении острых нарушений мозгового кровообращения
Антиоксидантная система: контроль за процессами перекисного окисления липидов при ишемии мозга
Модели ишемии головного мозга
Метод определения концентрации малонового диальдегида в
Исследование динамики ТБК-активных продуктов при моделировании ишемии головного мозга
Навигация
Метод определения концентрации малонового диальдегида в
Свободно-радикальные процессы при экспериментальной ишемии головного мозга
71890
знаков
5
таблиц
4
изображения
2.2.2. Метод определения концентрации малонового диальдегида в
сыворотке крови
Концентрацию малонового диальдегида определяли по методу Uchiyama M., Mihara M. [75]. К 3 мл 1,4 % ортофосфорной кислоты добавляли 0,25 мл сыворотки крови, затем приливали 1 мл 0,5 % раствора тиобарбитуровой кислоты и помещали в кипящую водяную баню на 45 минут. Пробы охлаждали, добавляли 4 мл бутанола и встряхивали в течение 1 мин до образования суспензии.
После центрифугирования супернатант, фотометрировали при двух длинах волн λ=535 нм и λ=570 нм против холостой пробы в кювете с длинной оптического пути 1 см. расчет содержания ТБК-активных продуктов проводили по формуле С=(D535 - D 570 )/0,156 х 16, где С – концентрация ТБК-активных продуктов в опытной пробе; D535 - оптическая плотность пробы при 535 нм; D570 – оптическая плотность при 570 нм; 0,156 – коэффициент молярной экстинкции комплекса малоновый диальдегид-ТБК в л/мкмоль/см; 16 – коэффициент разведения сыворотки.
2.2.3. Метод люминолзависимой хемилюминесценции в цельной крови
Хемилюминесценцию измеряли на аппарате ХЛМ-003 в соответствии с инструкцией к прибору и методическими рекомендациями авторов разработки [10, 23, 59, 60].
Перед исследованием отбирали необходимое количество рабочего раствора люминола из расчета 2 мл на одну пробу и нагревали в термостате до 37 °С. Предварительно разливали по 2 мл раствора в стаканчики для измерения хемилюминесценции, которые также помещали в термостат. В 2 мл теплого раствора люминола добавляли 0,1 мл гепаринизированной крови, тщательно перемешивали и помещали в кюветную камеру прибора, настроенного по программе КРОВЬ (термостат включен, мешалка выключена, время измерения 10 минут).
2.3. Статистическая обработка результатов исследования
Данные представлены в виде медианы и интерквартильного размаха от 25 (low quartile) до 75 квартиля ( high quartile) [40].
Сравнение между группами было выполнено с использованием теста Манна – Уитни, при сравнении более 2 групп применялся тест Крускала – Уоллиса. Для сравнения относительных величин применялся критерий χ². Для исследования корреляционных взаимодействий выполнялся корреляционный анализ Спирмена.
Различия считались статистически значимыми при р<0,05. Все статистические расчеты проводились с помощью пакета программ "Statistica 5,5".
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Свободнорадикальные процессы при ишемическом инсульте
Ишемия мозга сопровождается развитием сложного каскада патобиохимических реакций. Согласно современным представлениям, взаимодействие избыточных концентраций возбуждающих нейромедиаторов (глутамата) с N-метил-D-аспартатными рецепторами приводит к увеличению концентрации свободного кальция в цитоплазме нервных клеток. Содержание свободного Са2+ возрастает и в результате открытия потенциалзависимых ионных каналов при деполяризации нейронов, а также выхода кальция из внутриклеточных депо (эндоплазматического ретикулума, митохондрий). Последующая активация кальцийзависимых ферментов, в т.ч. и конститутивной NOS, приводит к усилению синтеза NO и формированию других свободных радикалов (супероксида, гидроксирадикалов, перекиси водорода).
Т.о., оксидантный стресс выступает как один из ведущих факторов повреждения мозга при ишемии. В нашей работе оценка показателей, характеризующих свободнорадикальной окисление, осуществлялась по определению концентрации ТБК-активных продуктов – малонового диальдегида (МДА), показателям люминолзависимой хемилюминесценции.
3.2. Исследование активности хемилюминесценции цельной крови и концентрации МДА в сыворотке крови при экспериментальной ишемии головного мозга
Центральное место в изучении ишемического инсульта занимают экспериментальные модели на животных [65]. Именно по результатам эксперимента сформулированы основные положения о патогенезе и морфогенезе ишемического инсульта. Хотя следует отметить, что универсальной модели, адекватно воспроизводящую ишемию человеческого мозга, на сегодня пока не существует.
Исходя из поставленных задач данного исследования, нами изучена активность хемилюминесценции цельной крови и концентрация МДА в сыворотке крови, как биохимических показателей, характеризующих свободно-радикальное окисление, на экспериментальной модели ишемии головного мозга крыс.
3.2.1 Показатели свободнорадикального окисления при моделировании ишемии головного мозга
Избыточный синтез оксида азота и оксидантный стресс являются основными звеньями последнего этапа формирования очагового некроза головного мозга – экспрессии, на котором происходят необратимые изменения. Это звено каскада характеризуется накоплением высокотоксичных соединений, приводящих к гибели клетки. Показатели оксидантного стресса в эксперименте были оценены по содержанию в сыворотке крови крыс ТБК-активных продуктов и показателям люминолзависимой хемилюминесценции цельной крови.
Похожие работы
... кальциевых каналов. Нимодипин Нимодипин - блокатор кальциевых каналов, производное дигидропиридина. Избирательно взаимодействует с кальциевыми каналами типа L и блокирует трансмембранное поступление ионов кальция. Фармакологическое действие: Особенностью препарата является преимущественное влияние на кровоснабжение мозга. Препарат оказывает дилатирующее действие на сосуды головного мозга ...
... 036.При инфаркте в бассейне передней артерии сосудистого сплетения (передняя ворсинчатая) не бывает #а)гемиплегии #б)гемианестезии *#в)афазии #г)вазомоторных нарушений в области парализованных конечностей #д)гемианопсии 037.Препараты наперстянки и строфанта при декомпенсации дисциркуляторной энцефалопатии назначают #а)для нормализации сердечного ритма ...
... микоплазм представляют собой группу повышенного риска по развитию у них неопластического процесса, однако эти вопросы требуют дальнейшего изучения. Хламидийная инфекция в акушерстве и гинекологии В. Н. Прилепская, И. Ю. Абуд Инфекции, вызываемые микроорганизмом Chlamydia Trachomatis (СТ), в настоящее время признаны одними из наиболее распространенных заболеваний, передаваемых половым путем ...
... Классическим является спектр манипулятивных методик: от советов Карнеги до нейролингвистического программирования и разнообразных тренингов (женского обаяния, личностного роста, сексуальный тренинг и пр.). В клинической психологии психокоррекция используется при выявляемых у клиента психологических проблемах, возникающих в связи с характерологическими девиациями и личностными аномалиями, а также ...
0 комментариев