Методические рекомендации к определению и выведению гемограммы у животных

Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия

Кафедра физиологии сельскохозяйственных животных и зоологии

Методические рекомендации к определению и выведению гемограммы у животных

Ульяновск, 2005 г.

 

УДК

Н.А.Любин, Л.Б.Конова.

Методические рекомендации к определению и выведению гемограммы у сельскохозяйственных и лабораторных животных при патологиях.

Для студентов и аспирантов факультетов ветеринарной медицины и технологического. Ульяновск, ГСХА, 2005, с.

При подготовке настоящих рекомендаций был использован опыт работы…

РЕЦЕНЗЕНТ: В.А.Ермолаев, доктор ветеринарных наук, профессор

Рекомендовано к изданию

методической комиссией

факультета ветеринарной медицины

 Протокол № от 2005 г.

 Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия, 2005 г

МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ МАЗКОВ КРОВИ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ

А. ВЗЯТИЕ КРОВИ И ПОЛУЧЕНИЕ МАЗКА

Циркулирующая в сосудистой системе кровь представляет более или менее равномерную взвесь в плазме форменных элементов: эритроцитов, лейко­цитов и кровяных пластинок (у птиц, рептилий и амфибий — тромбоцитов). Абсолютное количество и соотношение отдельных групп клеток в крови раз­личных видов животных неодинаковы. Наибольшие колебания дают эритроциты: от 3,5 млн. в 1 мм ³ крови кур до 14,4 млн. в том же объёме крови коз. Несколько меньше видовые колеба­ния количества белых кровяных телец: в 1 мм ³ крови млекопитающих содержится от 5 до 15 тыс. лейкоцитов. Количество лейкоцитов в крови птиц значительно выше: у кур, например оно, доходит до 35 тыс., а у гусей до 38 тыс. в 1 мм ³. Наконец, со­держание кровяных пластинок в 1 мм³ крови колеблется от 200 до 400 тыс.

В крови, взятой из различных участков сосуди­стой системы, находится далеко не одина- ковое коли­чество кровяных телец, особенно, и это наиболее важно, лейкоцитов. Значительно колеблется при этом и соотношение отдельных форм белой крови (табл.1,2).

Таблица1

Количество лейкоцитов в различных участках кровяного русла у кроликов

Название органа или сосуда, ткани	%	Название органа или сосуда, ткани	%
Паренхима печени	83,9	Лёгкие .	74,4
Паренхима селезенки	385, 3	Vena. Pulmon.	43,9
Почки	103,8	Мышцы сердца	61,7
Надпочечники	73,8	Костный мозг	128,29
Vena mesent.	89,0	Vena. femoralis	62,4
Art. mesent.	84,4	Аrt . femoralis	69,9
Vena cava caud.	4.9	Vena. renalis	60,5

Если принять среднее количество лейкоцитов в 1 мм³ крови из ушной вены за 100%, то в крови из сосудов дру­гих органов содержится:

Поэтому важно брать кровь для анализа всегда из одного и того же сосуда или группы сосудов. У всех сельскохозяйственных млекопитающих таким местом являются вены уха, у кур — гребень, у уток и гусей — мякоть ступни ноги.

Таблица 2 Состав белой крови свиней

Кровь	Базофилы	Эозино-филы	Нейтрофилы			Лимфо-циты	Моноциты
			Юные	Палочко ядерные.	Сегменто ядерные.
Из вены уха	0,5	2,5	1,0	5,5	31,5	55,5	3,5
Из сердца	до 0,1	0,4	1,0	10,0	62,0	24,5	4,0

Количество лейкоцитов зависит и от физиологи­ческого состояния животного.

У многих сельскохозяйственных и лабораторных животных заметно выражены пищеварительный лей­коцитоз (особенно у собаки), менее у лошади, и коле­бания количества лейкоцитов и (особенно) эритро­цитов при мышечной работе. При некоторых патологических состояниях имеет место ретенция белых кровяных телец в сосудах пе­чени и надпочечника. Лейкоцитоз наблюдается также во второй половине беременности.

Место взятия крови тщательно выстригается и если нужно, промывается водой с мылом, затем спир­том (или спиртом с эфиром). Рекомендуется тщатель­но растирать место взятия крови ваткой со спиртом и эфиром, что вызывает местную гиперемию и вместе с тем помогает избежать случайных колебаний лей­коцитарной формулы, связанных с некоторым застоем крови в мелких венах уха. Особенно следует иметь в виду возможное избирательное скопление в них эозинофилов.

Хорошие мазки крови можно получить только на очень чистых, обезжиренных предметных стёклах, тщательно промытых сначала горячей водой с мылом, а затем, после высушивания, — спиртом с эфиром. Промывание в спирте с эфиром особенно важно для полного обезжиривания стёкол. Если используются уже бывшие в употреблении стёкла, то их необходи­мо предварительно прокипятить в воде с содой.

Прокол тканей для получения крови лучше всего производить иглой Франка, но можно употреблять и обыкновенную иглу или специальное перо для уколов.

Первую выступившую на поверхность каплю крови быстро и тщательно стирают с места укола, а из вто­рой и последующих приготовляют мазки.

Приготовление мазка крови. Чистое предметное стекло держат, как показано на рисунке 1, между большим и средним пальцами левой руки. В правой руке, теми же или большим и указательным пальца­ми держат чистое покровное или тонкое шлифован­ное предметное стекло. По крайней мере, одно ребро таких стёкол должно быть уже ширины того пред­метного стекла, на котором приготовляют мазок. Обычно это достигается подбором или обламыванием углов шлифованного стекла.

Рис. 1. Приготовление мазка крови.

Поверхностью предметного стекла, зажатого в ле­вой руке, осторожно, но быстро касаются выступив­шей из прокола капли крови, стараясь сделать это ближе к среднему пальцу и, сейчас же, приведя стек­ло в горизонтальное положение, прикладывают к его поверхности узкое ребро того стекла, которое держат в правой руке. Приложенное ребро должно лежать перпендикулярно к длинным граням предметного отекла, а самое приложенное стекло нужно наклонить в сторону капли под углом в 40—50°. Держа это стек­ло, таким образом, осторожно двигают его в сторону капли до соприкосновения с нею. Как только капля, коснувшись подвижного стекла, разойдётся по линии соприкосновения стёкол, верхнее наклонное стекло быстрым, но ровным движением направляют обратно, в сторону большого пальца, сохраняя всё время преж­ний угол наклона в 40—50°. Полученный таким спо­собом мазок высушивают на воздухе и на нём пи­шут иглой название или номер животного, его пол ((J или Q), и дату взятия крови.

Можно изготовлять мазки и на покровных стёк­лах. Для этого одним покровным стеклом берут очень маленькую каплю крови и прикладывают к нему другое покровное стекло так, чтобы углы одно­го стекла легли на середину рёбер другого. Как только капля крови разойдётся тончайшим слоем между обоими стёклами, последние параллельным

движением в противоположные стороны разводятся, и, таким образом, получаются два мазка.

 

В. ФИКСАЦИЯ МАЗКА

Чтобы закрепить все форменные элементы крови в препарате с максимально возможным сохранением их структуры и подготовить мазки к последующей окраске, существуют различные методы фиксации мазков. Наибольшее практическое значение имеют:

1. Фиксация абсолютным метиловым спиртом. Это лучший метод фиксации. Сухие мазки на 3 ми­нуты погружаются в абсолютный метиловый спирт или на то же время спирт наливается на мазок, вполне покрывая препарат. Через 3 минуты мазки вынимают (или сливают с них спирт) и просушивают на воздухе.

2. Фиксация абсолютным этиловым спиртом, смешанным с равным количеством эфира. Фиксация длится 10—30 минут в обычных сосудах для гистологических растворов. Этот способ значительно хуже, так как даёт много артефактов.

 

В. ОКРАСКА МАЗКА. ОСНОВНОЙ МЕТОД ОКРАСКИ ПО РОМАНОВСКОМУ

Посредством окраски препарата наиболее отчетливо выявляется тончайшая структура, как ядра, так и цитоплазмы. Принцип современных методов окраски мазков крови открыт в 1891 г. Д. Л. Романовским и заключается в избирательном поглощении (химическом и коллоидальнохимическом) веществами клетки трёх красящих веществ — азура метиленовой синьки и эозина. Азур («красная из метиленовой синьки») имеет амфотерноосновную ре­акцию, метиленовая синька — щелочную, эозин — кислую.

Ядро клетки, богатое нуклеопротеидами и нуклеотидами, базофильно, т. е. окрашивается основными красками с избирательным поглощением а з у р а.

Цитоплазма молодых клеток, от­носительно богатая нуклеиновыми кислотами (нуклеотидами), также, хотя и в меньшей степени, базофильна. При этом избирательно погло­щается преимущественно метиленовая синь­ка. Цитоплазма же многих зрелых клеток крови (прежде всего нейтрофилов) ацидофильна (оксифильна).

Лимфоциты сохраняют базофилию цитоплазмы на всех стадиях развития, избирательно поглощая метиленовую синьку. Наличие базофилии молодой цитоплазмы, указывающее на относительное богатство её нуклеиновыми кислотами, связано с сохранением способности молодых клеток к интенсивному синтезу белков.

Лимфоциты сохраняют эту способность на весь онтогенез.

Базофилия гранул базофилов определяется наличием в них кислой слизи (мукоитиносерная кислота).

В лабораторной практике чаще всего пользуются следующими способами окраски по методу Романовского.

Окраска раствором Гимза

Краска Гимза, применяемая при окраске по ме­тоду Романовского, представляет собой комбинацию метилен-азура (азур II) и эозина (В, жёлтого). Она состоит из азура II*—3,0, эозина В —0,8, хими­чески чистого глицерина 250,0 и метилового спирта 250,0.

Эта краска обычно отпускается готовой. Очень многое в успехе окрашивания определяет безупреч­ное качество раствора краски, а последнее в высшей степени зависит от реакции воды.

Для приготовления рабочего раствора краски употребляется дважды дистиллированная вода. Обыч­но она имеет рН=5,4, т. е. слишком кисла, и даёт слабую, плохую окраску. Поэтому такую воду нуж­но подщелочить, прибавив к 2—3 л воды несколько капель 1-процентного раствора соды. Лучшим рН воды следует считать 6,8—6,9 (до 7,1). При более щелочной реакции воды мазки получаются более синими (даже эритроциты).

Практически пригодность воды к окрас­ке определяют по растворению в ней гематоксилина. В 10 см³ дистиллированной воды (лучше всего в часовом стёклышке) кладут пинцетом несколько крупинок гематоксили­на. Не ранее как через 1 минуту и не позже 5 минут вода должна окраситься в ясный слабофиолетовый цвет. Более раннее и интенсивное окрашивание ука­зывает на сильно щелочную реакцию, более позд­нее — на кислую.

Если нет очень хорошего гематоксилина, то реак­цию воды, подщелачиваемой раствором соды, можно определить, пользуясь в качестве индикатора ней­тральной красной. В два химических стакана (или кол­бы Эрленмейера) наливают по 200 см³ дистиллированной воды и прибавляют 1 — 2 капли 1-процентного раствора нейтральной красной. При рН дистиллированной воды, равном 5,4—5,5, получается свекловично-красная (рубиновая) окраска. После этого в один из стаканов прибавляют по капле, тщательно разме­шивая, 1% раствор соды до появления слабого оранжевого оттенка (цвет лососины). Нельзя доводить воду до ясно оранжевого и, тем более, жёл­того цвета, так как в этом случае реакция будет сильно щелочной.

Более кропотливо пользоваться индикаторами Михаэлиса и менее точно — универсальным индикатором.

Лучше всего для получения нужной и стойкой реакции воды применять буферные рас­творы. Хорошими буферными растворами для этой цели будут фосфатные. Для них нужно иметь два исходных раствора:

1. Двуосновного фосфата натрия (Na₂HP0₄. •2Н₂0)—17,814 г на 1 л (рН =8,302).

2. Одноосновного фосфата калия (КН₂Р0₄) — 13,638 г на 1 л (рН =4,529).

Азур II — смесь в равных частях красок: азур I (диметилтиониохлорид) и метиленовой синьки. В постарев­шем растворе исходной краски Гимза метиленовая синька часто плохо окрашивает цитоплазму лимфоцитов (нет чисто голубого цвета). Тогда необходимо добавить метилено­вой синьки в исходный раствор краски.

Если к литру дистиллированной воды прибавить по 5 см³ того и другого раствора, то рН такой воды будет равен 6,813. Случайные колебания концентра­ции углекислоты в воздухе при таком способе не ока­зывают влияния на рН воды.

Перед окраской (ex tempore) к дистиллированной воде прибавляют исходный раствор краски Гимза из расчёта 1,0—1,5 капли краски на 1 см³ воды.

Рабочий раствор краски наливается пипеткой (ос­торожно!) на предметное стекло так, чтобы препарат (мазок крови) был полностью покрыт краской. Стёк­ла помещаются над широкой чашкой Петри на стек­лянных палочках, соединённых резиновыми трубками попарно. Во избежание осадков, которые невозможно отмыть, можно стёкла укладывать мазками вниз, на стеклянные палочки, лежащие в чашке Петри, так, чтобы краска покрывала мазки полностью (способ академика Н. Д. Стражеско).

При первом способе на один мазок тратится 2,5— 3,0 см³ рабочего раствора краски.

Через 20—30 минут краску сливают, препараты промывают водопроводной чистой водой и высуши­вают на воздухе. Для окраски старой краской тре­буется меньше времени.

При окраске раствором Гимза хорошо дифференцируется структура ядра, несколько хуже — структура цитоплазмы, особенно нейтрофильная зернистость. Однако при очень умелом окрашивании и зернис­тость выявляется достаточно хорошо.

По этому методу плохо окрашиваются псевдоэозинофилы (палочкозернистые гранулоциты) крови сель­скохозяйственных птиц.

Окрашенные краской Гимза ядра имеют красивый фиолетово-красный цвет (цвет вишни); нейтрофиль­ная зернистость — розовато-фиолетовый; эозинофильная зернистость — розовый или красно-розовый; базофильная —цвета мальвы; азурофильная — красно-фиолетового цвета.

Цитоплазма лимфоцитов — голу­бая, моноцитов — от голубовато-серой до пепельно-серой.

Эритроциты — красновато-розового цвета, полихроматофилъные эритроциты — синеватые, базофильная пунктация эритроцитов — синяя.

Если нет хорошей готовой краски Гимза, то можно хорошо окрасить мазки по Н о х т у. Для окраски по Нохту приготовляется два раствора: 1) 1-промил-льный раствор азура II; 2) 1-промилльный раствор эозина. Перед приготовлением рабочего раствора кра­ску нужно оттитровать. Для этого сначала берут на 3 см³ дистиллированной воды 4 капли раствора азу­ра II и 3 капли раствора эозина (т. е. в отношении 4 : 3). Если окраска мазков неправильна, пробуют отношение 4 : 4, или 4 : 5, или 4 : 6, и т. д.

Достаточно интенсивное окрашивание получается, если на 1,5 см³ азура II берётся 1,0 см³ эозина и 6 см³ воды.

Модификация Паппенгейма (Май-Грюнвальд — Гимза)

При этом способе окраски предварительная фик­сация мазка не нужна, так как первая краска — Май-Грюнвальд имеет растворителем метиловый спирт.

Метод окраски двухмоментный. Сперва мазок по­крывают 2 см³ неразведённой краски

Май-Грюнвальд, представляющей собой раствор в метиловом спирте эозина и метиленовой синьки. Если нет гото­вой надёжной краски, то растворяют приготовленный фабричным способом сухой порошок Май-Грюнвальд: 1,0 г порошка на 100 см³ абсолютного метилового спирта и 50 см³ чистого глицерина. Хорошая крас­ка получается и без глицерина.

Через 3 минуты к краске Май-Грюнвальд, находя­щейся на мазке, прибавляют 2 см³ дистиллированной воды и тщательно смешивают их продуванием или последовательным набиранием и выпусканием через тонко оттянутую пипетку. Когда, примерно через 1 минуту, мазок приобретает розовый оттенок, крас­ку с препарата сливают и после этого, не высуши­вая, 10—12—15 минут красят мазок рабочим рас­твором краски Гимза, а затем промывают чистой водопроводной водой. Этот способ окраски удачно сочетает хорошее выявление зернистости клеток кра­ской Май-Грюнвальд с чёткой окраской структуры ядра раствором Гимза.

Такая окраска особенно ценна для выявления псевдоэозинофилов (специальных гранулоцитов) ку­риной крови.

Результаты окраски: ядра красно-фиолетовые, ци­топлазма лимфоцитов голубовато-синяя, азурофильная зернистость лимфоцитов пурпурно-красная, миелоидная азурофилия фиолетово-коричневая, так же как и центральная субстанция кровяных пластинок. Нейтрофильная зернистость коричневато-красная, до синевато-розовой; эозинофильная — от красно-оранжевой до кирпично-красного цвета; базофильная зернистость тёмного ультрамариново-фиолето­вого цвета (метахромазия); эритроциты медно-розовые; полихроматофильные эритроциты синеватые; базофильная пунктация эритроцитов (слабо выявляе­мая) синего цвета *.

В целом, мазки, окрашенные по этому способу, несколько богаче оттенками, чем при окраске раство­ром Гимза, но кажутся более тёмными, «мрачными».

Цветные таблицы картин крови выполнены с препаратов крови, окрашенных по Романовскому в модификации Паппенгейма, лучше всего диференцирующей струк­туру клеток.

 

Ускоренная окраска раствором Гимза (новая модификация)

Этот метод даёт хорошие результаты только в ру­ках опытного исследователя. Преимущество — бы­строта приготовления препарата, так как фиксация и окрашивание происходят одновременно.

Для работы необходимы капельницы ёмкостью в 30 см³, в которые наливается исходный раствор краски Гимза, разведённый пополам метиловым спир­том или чистейшим ацетоном. В хорошо закупоренной склянке этот раствор может сохраняться месяцами.

Окрашивание производится или в чашках со спе­циальными перекладинками, или в обычных чашках Петри. На свежий мазок (не позднее 2-дневного!), высушенный на воздухе и не фиксированный, нали­вают из капельницы около 20 капель краски. Чтобы предохранить краску от испарения, чашка, в которой лежат препараты, закрывается стеклом.

Через 1/2 минуты — 1 минуту к краске на мазке приливают около 10 см³ подщелочённой дистиллированной воды (1—2 капли 1-процентного раствора щелочи на 50 см³ воды). Покачиванием чашечки хорошо перемешивают краску с подлитой водой. Через 10— 15 минут воду с краской сливают и мазок промывают водопроводной (недистиллированной!) водой.

В случае приготовления основного раствора с аце­тоном особенно хорошо выявляется зернистость структура ядер кровяные пластинки.

• Описание цветов дано, с некоторыми небольшими изменением, по А. II. Крюкову.

Окраска крови и кровепаразитов по Г. Эпштейну

Фиксация метиловым спиртом

Готовят два раствора.

1-й: дистиллированной воды 100 см³; лимоннокислого лития — 1 г; толуидиновой голубой — 1г. По­сле разведения профильтровать.

2-й: насыщенный водный раствор пикриновой кислоты.

Мазки красят 20—30 минут в первом растворе и, ополоснув в проточной воде, помещают на 1—2 секунды во второй раствор (пикриновой кислоты). Промывают (тщательно!) снова в водопроводной воде и после этого быстро обсушивают фильтровальной бумагой.

Окраска: эритроциты зелёные; ядра лейкоцитов фиолетово-синие; базофильная зернистость вишнё­вая; эозинофильная зернистость изумрудно-зелёная; нейтрофильная зернистость серая; у кровепаразитов ядро красное, а цитоплазма синяя.

 

Окраска составом Лейшмана

На нефиксированный препарат налить 15—20 ка­пель готового раствора краски Лейшмана (0,1 г порошка краски растворить в 10 см³ метилового спирта). Через 2,5—3 минуты прибавить 30 капель дестиллированной воды и красить ещё 5 минут. Про­мыть в течение 2—3 минут проточной водой и высу­шить на воздухе.

 

Специальные способы окраски и фиксации мазка

а) Получение и окраска толстой капли. На хорошо промытое (подщелочённой водой, затем спиртом с эфиром) предметное стекло наносят 2 крупные капли крови. Собственно, достаточно одной капли, но вто­рая служит «резервом» на случай неосторожного сти­рания одной капли, неудачи окраски и т. д. Каждая капля сейчас же, с помощью иглы, распределяется по стеклу ровным слоем — примерно в 1\4 - 1\2 мм толщины, чтобы получились пятна размером с деся­тикопеечную монету. Препараты тщательно высуши­ваются (в термостате при 37° или на солнце) в течение получаса.

После этого высохший препарат дважды окраши­вают рабочим раствором Гимза (1 капля исходного спиртового раствора Гимза на 1 см³ дистиллирован­ной воды).

Первое окрашивание длится около 3 минут после того, как в растворе краски появится красное облачко растворившегося гемоглобина. Затем один конец предметного стекла слегка приподни­мают и старый раствор Гимза заменяют новым, при­ливая его очень осторожно с приподнятого конца препарата, в то время как прежний раствор краски с гемоглобином стекает с другого конца. Когда таким образом вся старая краска сменена новой, предмет­ное стекло снова устанавливают горизонтально и продолжают докрашивание ещё 25 минут.

Значение метода состоит в том, что в толстой капле удается обнаружить таких паразитов крови, которые находятся в ней в небольших количествах. Быстро устанавливается наличие или отсутствие эозинофилов и производится их подсчет их подсчёт.

То же самое в отношении базофильных эритроцитов.

б) Оксидазная и пероксидазиая реакции лейкоцитов. Оксидазная реакция основана на возникновении индофеноловой голубой краски при воздействии оки­сляющих ферментов на анафтол и диметилпарафенилендиамин; в местах локализации оксидаз в клетке возникает синее окрашивание.

 

Техника реакции состоит в следующем:

1. Фиксация мазка в смеси из 1 части 40-про­центного формальдегида и 9 частей 95-процентного спирта в продолжение нескольких секунд пли 40-процентного формальдегида и абсолютного алкоголя аа в продолжение 15—20 минут.

2. Окраска: а) 3 минуты слегка разведённым 1-процентным водным щелочным раствором анафтола (раствор приготовляется следующим образом: анафтол при нагревании в дестиллированной воде поднимается кверху и плавает в жидком виде; после введения в раствор кристалла едкой щёлочи анаф­тол растворяется в воде); б) не удаляя анафтола, на препарат наслаивают 1-процентный водный раствор диметилпарафенилендиамина. Через несколько ми­нут зернистость лейкоцитов, содержащая оксидазу, становится темносиней. Докрашивается препарат сильно разведённым раствором фуксина Циля.

Пероксидазная реакция.

а) Окраска по Край-биш в модификации Грэма. Хорошо высохший мазок в течение 10—15 минут фиксиро­вать жидкостью, состоящей из 1 части 40-процент­ного формалина и 9 частей 95-процентного спирта. После фиксации слегка промыть водой и покрыть раствором бензидина (приготовление: к 10 см³ 40-процентного этилового спирта прибавляется не­сколько кристаллов бензидина +00,2 см³ 3-процент­ной перекиси водорода). Окраска длится 5 минут. Затем смыть водой.

Места локализации пероксидаз окрашиваются сначала в сероватый, а затем в золотисто-коричне­вый цвет.

Последующее докрашивание — тионином, метиленовой синькой или краской Гимза.

б) Окраска по Сато. Воздушносухие маз­ки фиксируют в течение 30 секунд ¹/₂-процентным раствором медного купороса (CuS0₄) и затем окраши­вают бензидином с перекисью водорода (рецепт приготовления — как в предыдущем методе). Через 2 минуты препарат осторожно промывают дистил­лированной водой, на мазок наливают слой 1-процент­ного водного раствора сафранина, через 15—20 минут сафранин смывают водой и высушивают препарат на воздухе (избегать высушивания фильтровальной бу­магой!).

Пероксидазо-положительные гранулы окрашивают­ся в темносиний цвет, ядра — в красно-жёлтый; эритроциты не окрашиваются.

Посредством оксидазной и пероксидазной реакций облегчается диференциация миэлоидных клеток от лимфоидных. Обе реакции дают аналогичные резуль­таты, но оксидазная реакция более чувствительна.

Нейтрофилы и эозинофилы реагируют резко поло­жительно, базофилы так же, но только на ранних стадиях развития. Зрелые формы оксидазо-отрицательны. Однако ряд авторов считает, что и зрелые базофилы оксидазо-положительны.

Лимфоциты дают безусловно отрицательную реак­цию. Моноциты — иногда очень слабо положительную.

С клинической точки зрения представляет инте­рес тот факт, что при некоторых инфекционных забо­леваниях у нейтрофилов исчезают положительная оксидазная п пероксидазная реакции.

в) Окраска токсической зерни­стости раствором Гимза при рН =5,4. Токсическую зернистость, в отличие от обычной, нормальной зернистости гетерофилов (нейтрофилов), избирательно окрашивают, при окраске по принципу Романовского раствором краски Гимза, применяя буферный раствор с рН =5,4.

Буферный раствор:

Едкий натр (химически чистый) . 21,6 г

Уксусная кислота (химически чистая) .............. 27,0 »

Дистиллированная вода до.....1000,0 см³

Приготовление краски:

Исходной краски Гимза …………10см³

Дистиллигрованной воды ……….40 »

Буферного раствора до ………….100 »

Свежие мазки окрашивают в продолжение 1 часа, старые препараты — дольше (до 2 часов). Краска с мазка смывается буферным раствором и затем высу­шивается, как обычно.

При окрашивании препарат нужно класть на рас­твор краски мазком вниз.

Белые кровяные тельца – лейкоциты.

Лейкоциты (белые кровяные тельца) различаются между собой как морфологически, так и по биологи­ческой роли в организме. Будучи полноценными клетками, имеющими протоплазму и ядро, лейкоци­ты обладают отчётливо выраженной способностью к активному способу питания путём захвата и внут­риклеточного переваривания попадающих в кровь органических тел. Эта способность приобретает первостепенное биологическое значение в случае проникновения в организм патогенных мик­робов: пожирание их лейкоцитами — фагоци­тоз (Мечников, 1882—1893) — составляет важней­шее средство борьбы организма с инфекцией.

Наряду с фагоцитозом, весьма важное значение имеет образование лейкоцитами иммун­ных тел. У многих низших, а весьма возможно и высших животных особые лейкоциты выполняют также функцию переноса питательных веществ (трефоциты). Наконец, отдель­ные виды лейкоцитов (эозинофилы высших животных) способны обезвреживать токсины. Крупную роль лейкоциты играют в обмене веществ и в образовании так называемых трефонов — стимуляторов клеточ­ного роста, особенно в условиях регенерации тканей.

Структурные различия отдельных видов бе­лых кровяных телец изучены, начиная с работ П. Эрлиха (Р. Ehrlich, 1877—1898 гг.), достаточно хорошо. Значительно менее изучены их функцио­нальные особенности, их целлюлярная физиология. Несмотря на огромное количество работ, онтогенез белой крови полностью ещё не выяснен. Наконец, сложная нейро-гуморальная регуляция сосудистой и внесосудистой белой крови исследована в чрезвы­чайно малой степени. Мало данных имеется даже о длительности жизни белых кровяных телец. По не­которым авторам, она весьма невелика (3—4 дня).

Основным принципом современной классификации лейкоцитов является морфологический.

У различных сельскохозяйственных и лаборатор­ных животных один и тот же тип лейкоцитов (особен­но эозинофилы и нейтрофилы, или гетерофилы) имеет специфические отличия в структуре. Однако в главном структура каждого типа лейкоцитов у всех сельскохозяйственных животных весьма близка и поэтому целесообразно вначале дать их общее описание, без видовой дифференциации.

По структуре ядро эозинофилов близко к ядру нейтрофилов, но несколько бледнее и выглядит грубее, так как чередующиеся светлые (оксихроматин) и тёмные (базихроматин) участки ядра эозинофилов крупнее, чем у нейтрофилов.

По мере созревания клетки ядро эозинофильных лейкоцитов изменяется в том же направлении, что и нейтрофильных, т. е. ядерный жгут скручивается и утончается, сперва равномерно (юные и палочкоядерные формы),а затем отдельные участки (сегменты) почти перестают утончаться и остаются сравнитель­но толстыми, а находящиеся между ними — превра­щаются в "тончайшие нити (сегментоядерные фор­мы). Однако сегментация ядра эозинофилов выражена не очень резко. Очень частой, типичной формой яв­ляется 2-дольчатая форма ядра, причём дольки напо­минают формирующиеся и только что отрывающие­ся капли, обращенные друг к другу узкими концами, соединёнными перемычкой, или две груши, соединён­ные плодоножками. У овец полиморфность ядра эози­нофилов выражена сильнее. Хотя при некоторых болезнях можно наблюдать в крови изменение отношения между возрастными формами эозинофилов в сторону увеличения более молодых (палочкоядерных, юных и даже миэлоцитов. — «сдвиг ядра влево»), но, ввиду относительной малочисленности (3—10%) эозинофилов, учёт ядер­ного сдвига в лейкоцитарной формуле не произво­дится.

Эозинофилы имеют очень большое клиническое значение. Эозинофилы или исчезают из крови (анэо-винофилия), или уменьшаются в количестве (гипоэозинофилия), или, наконец, количество их резко нара­стает (гиперэозинофилия, или просто эозинофилия). Большинство инфекционных заболеваний в первом своём периоде связано с резким уменьшением коли­чества эозинофилов (гипоэозинофилия). Возврат эозинофилов в кровяное русло считают признаком ос­лабления болезни. При роже свиней и при многих инвазиях (особенно гельминтозах) наблюдается рез­кое увеличение эозинофилов (эозинофилия), доходя­щее у крупного рогатого скота до 40%. Эозинофилия встречается и при аллергических реакциях, причём здесь её связывают, так же как и при гельминтозах, с раздражением системы блуждающего нерва.

Функции эозинофилов недостаточно изучены.

Вероятна способность их зернистости к обезвре­живанию токсинов, а также участие зёрен в окисли­тельных процессах. Эозинофилы скопляются в ме­стах тканевой регенерации. Характерна локальная эовинофилия кишечника.

 

III.      Специальные зернистые лейкоциты, или нейтрофилы

Нейтрофилы (специальные зернистые лейкоциты, гетерофилы, псевдоэозинофилы или амфиоксифилы некоторых животных) имеют очень важное значение для клиники и физиологии.

Клетки нейтрофилов округлые, диаметром от 7,0 до 15,0 µ. В цитоплазме обильная, очень мелкая, нейтрофильная зернистость. Я д р о, по мере развития клетки, постепенно сегментируется. Зернистость ясно заметна даже в свежей неокрашенной крови. Эти при жизни клетки серебристо блестящие зёрнышки густо выполняют эндоплазму, передвигаясь с нею при амебоидных движениях клетки. Экто­плазма представляет собой тонкий гомогенный периферический слой, свободный от гранул. У не­которых животных (мыши, крысы и кошки) эерни-стость выражена очень слабо, но, однако, вопреки отрицанию Максимова, несомненно есть.

Цитоплазма оксифильна, окрашивается в бледнорозовый цвет, иногда почти бесцветна. Изред­ка в цитоплазме нейтрофилов встречаются неболь­шие участки, сохранившие базофилию, характерную для материнской клетки. Такие ясноголубые пятна получили название телец Деле (Dohle).

Окраска зернистости специальных гранулоцитов несколько различна у разных видов животных. По­этому в последнее время для нейтрофилов предложе­но новое, удачное наименование — гетерофилы.

 У обезьяны, собаки, кошки и свиньи зерни­стость имеет сродство к нейтральным краскам и при комбинациях красок по Романовскому окраши­вается в розово-фиолетовый цвет. У большинства же остальных млекопитающих зернистость амфофильна, т. е. красится как кислыми, так и основными крас­ками. У коровы, овцы, лошади и морской свинки (по Максимову) эти зёрна амфооксифильны, т. е. имеют большее сродство к кислым краскам; у кроли­ка они окрашиваются эозином в яркокрасный цвет и поэтому называются псевдоэозинофилами.

У неко­торых животных гранулы амфобазофильны. Зерни­стость псевдоэозинофилов кур и других домашних птиц окрашивается в яркокрасный цвет,весьма круп­на и в большинстве случаев (особенно у зрелых форм) имеет палочковидную и даже веретенообразную, с заострёнными концами, форму. У более молодых форм зёрна округлы (Лебедев). Ряд авторов (Букраба, Я. Соловей) считает, что у кур нет вообще псевдоэозинофилов, а только эозинофилы. Но большинство исследователей диференцирует эозинофилов от псев­доэозинофилов, и морфологически и функционально, сближая последних со специальными гранулоцитами (Максимов, Рухлядев, Клинебергер и Карл, Лебе­дев). Особенно тщательное исследование разницы между эозинофильной и псевдоэозинофильной зер­нистостью произвёл Лебедев (1940 г.). Он устано­вил, что при суправитальной окраске бриллианткрезиловая голубая окрашивает гранулы эозинофилов в голубовато-розовый цвет, а псевдоэозинофилов — в зеленовато-синий. Оксидазо- и пероксидазо-положительными оказались лишь эозинофилы. Окраска на липоиды по Зерту (Sehrt) дала положительный результат только с зернистостью эозинофилов. При обработке окрашенных препаратов смесью уксусной кислоты и спирта, зёрна эозинофилов сохраняют свою окраску, а верна псевдоэозинофилов обесцве­чиваются. Наконец, сдвиг ядра псевдоэозинофилов у кур был идентичен с закономерностями сдвига ядра нейтрофилов при ряде патологических состоя­ний у других животных. Следует, однако, отметить, что ранние стадии развития псевдоэозинофилов и эозинофилов, окрашенные растворами Гимза или по Паппенгейму, различать крайне трудно.

Разделение лейкоцитов на типы можно представить так:

Лейкоциты (белые кровяные тельца)
Гранулоциты			Агранулоциты
Имеют цитоплазматическую зернистость. Содержат оксидазу. По типу окислительного обмена отличаются более интенсивным поглощением кислорода и значительным анаэробным гликолизом			Не имеют цитоплазматической зернистости или имеют мелкую азурофильную зернистость, не определяющую функциональную значимость клетки. Оксидазы не содержат или содержат только следы по типу окислительного обмена менее интенсивно поглощают кислород и обладают вдвое слабейшей способностью к анаэробному гликолизу.
Базофилы или тучные клетки (с базофильностью в цитоплазме)	Эозинофилы (с ацидофильной зернистостью в цитоплазме	Нейтрофилы (гетерофилы), или специальные гранулоциты (с нейтрофильной зернистостью в цитоплазме)	Лимфоциты (цитоплазма голубая с перинуклеарной зоной. Округлое , темно прокрашивающееся ядро, относительно грубой структуры)	Моноциты (дымчато-серая, иногда с розоватым или лиловатым оттенком цитоплазма, несколько расчлененное, бледно окрашивающееся, тонкой структуры ядро)

Следует иметь в виду, что так называемая «структура» ядер является, при обычных способах фикса­ции, в том числе и фиксации метиловым спиртом, в значительной степени результатом коллоидальной флокуляции веществ ядра. В зависимости от при­меняемых фиксаторов, эта структура существенно из­меняется. На самом же деле, как показал П. В. Ма­каров (1948 г.), покоящееся нативное ядро — за исключением ядрышка — оптически пусто, без мик­роструктур. В период кариокинетического деления в нём возникают временные образования — хромо­сомы.

Поэтому в дальнейшем описании под структурой ядра следует понимать возникающие в ядре при взаимодействии с фиксирующими и красящими ве­ществами варьирующие образования — коагуляты. В ядрах различных клеток, в зависимости от специфи­ческих коллоидально химических различий их ядер­ной плазмы (кариоплазмы), эти коагуляты имеют не­которые морфологические особенности, которые и дают возможность различать между собою виды клеток.

А. ГРАНУЛОЦИТЫ

 

I. Базофилы

Базофильные гранулоциты, или тучные клетки, обычно круглой или округло-овальной формы, диаметром 8—15 µ. (у лошадей и коров несколько более крупные). Сама цитоплазма слабооксифильна и окрашивается в бледный, розовато-фиолетовый или, иногда. сыровато-голубой цвет, но находящиеся в ней крупные округлые зёрна (гранулы) резко базофилъной природы и окрашиваются метахроматически в тёмный красно-фиолетовый или ультрамариново-фиолетовый цвет (цвет мальвы — по Крюкову).. Зёр­на легко растворяются в воде и потому в препаратах, фиксированных плохо обезвоженным метиловым спиртом, часто на место верен в цитоплазме обра­зуются белые «окошечки». При фиксации абсолютным метиловым спиртом зёрна сохраняются хорошо. Расположение гранул в цитоплазме неравномер­ное, рыхлое. Часто они закрывают отдельные участки ядра. По своей химической природе базофильные зёр­на являются белками, близкими к гликопротеидам.

Ядро базофилов — неясной структуры, неправильно лопастное или округлое, окрашивает­ся в фиолетово-розовый цвет. В ядре расплывчато чередуются более светлые поля оксихроматина с темноокрашенными базихроматиновыми полями.

В базофилах чрезвычайно трудно различить ста­дии миэлоцита — юную, палочкоядерную и сегментоядерную. Вообще сегментированность ядра выра­жена слабо. Практического значения, для подсчёта лейкоцитарной формулы, дифференциация базофилов по степени их зрелости не имеет, прежде всего, пото­му, что в крови млекопитающих их очень мало: от 0,1 до 1—2%, в среднем 0,5%. Кровь сельскохозяй­ственных птиц содержит 3—4% базофилов, а содержа­ние их в крови лягушек доходит до 23%.

Вообще, содержание базофилов очень высоко у амфибий, рептилий и у некоторых рыб.

Функциональное значение базофилов не выяснено. Повидимому, они играют некоторую роль в защите организма при парентеральном введении чуждых белков. Они способны фагоцитировать и содержать окислительные ферменты. Ряд учёных считает их трефоцитами («питающие клетки» Либмана). Такие клетки, переносящие питательные вещества, особен­но широко распространены у беспозвоночных, где они часто преобладают.

Клиническое значение базофилов невелико. Коли­чество их несколько возрастает при инъекции бел­ков, при некоторых авитаминозах (группы В) и гепатических циррозах.

II. Эозинофилы

Эозинофилы (синонимы — оксифилы или ацидофилы) — это крупные (особенно у лошади) круглые клетки, диаметром от 8,2 до 19,8)1. Очень редко по­падаются карликовые формы эозинофилов (особенно у крупного рогатого скота при депрессии гемопоэза). Очень крупны Эозинофилы лошади.

Цитоплазма слегка базофилъна, бесцветна или голубоватого цвета. Зёрна ярко окрашены эози­ном в интенсивный красный или розово-красный цвет (по описанию Крюкова, в кирпично-красный). У птиц они скорее розовые, чем красные. У молодых форм гранулы часто окрашены базофильно и лишь постепенно, по мере созревания клетки, становятся ацидофильными. У кошек цвет верен красновато-пурпурный.

Размерь и форма гранул весьма различны. У лоша­ди .они очень крупные (до Зµ в поперечнике], покры­вают часть ядра и придают эозинофилу вид плода малины (табл. 1—2). Довольно крупные верна у эозинофилов кролика (до 1,5 µ). Значительно мельче эозинофильная зернистость овцы. У свиньи зерна очень правильной круглой формы.

Обычно зёрна эозпнофилов расположены очень тесно, у лошади они часто даже сдавливают друг дру­га и приобретают угловатую форму и между зёрна­ми трудно различить цитоплазму. Однако у некото­рых животных (например, у овцы) зерна могут быть расположены сравнительно редко, особенно в моло­дых клетках, и тогда цитоплазма видна хорошо. Ти­пичные эозинофилы имеются в крови почти у всех позвоночных (кроме некоторых рыб). У п т и ц (Казаринов, Лебедев) зёрна эозинофилов относительно мелки. У рептилий эозинофилы составляют большинство лейкоцитов. Ацидофильные зёрна эози­нофилов рептилий, плотно расположенные в цито­плазме, то шарообразны, то овальны, иногда имеют форму ромбических кристаллоидов или, наконец, представляют собой глыбки неправильной формы. Эозинофилы амфибий весьма напоминают собой аналогичные клетки у млекопитающих. Их гранулы относительно весьма велики. У большинства рыб имеются типичные эозинофилы, чаще всего с простым, круглым ядром. У некоторых видов рыб эозинофилы атипичны, — это лимфоидные клетки с редкими, но очень крупными гранулами, в цитоплазме. Наконец, в крови некоторых видов рыб эозинофилы, невиди­мому, не содержатся.

Микрохимическими методами установлена липоидно-белковая природа зёрен эозинофилов; они со­держат фосфор и, возможно, железо. По Кальману (Kallman), юные эозинофилы птиц имеют гранулы нуклеопротеидной природы; позднее они становятся чисто альбуминовыми.

Зёрна эозинофилов видны даже в неокрашенных клетках, где они выделяются жёлтым цветом и вы­соким показателем преломления.

У амфибий, особенно лягушек, при хорошей фик­сации и окраске по Романовскому в модификации Паппенгейма, зернистость удаётся выявить доста­точно ясно. Зернистость гетерофилов у рептилий выражена слабо, но утверждение Максимова, что цитоплазма гетерофилов амфибий красится диффузно или выявляет сетчатое строение, но не содержит различных гранул, несомненно неправильно.

Окрашиваемость гранул в гетерофилах рыб сильно варьирует; у одних видов зернистость нейтрофильна, у других амфофильна. Наконец, у некоторых видов рыб гетерофилы (типичные по сегментирован­ному ядру) до сих пор не найдены.

Форма ядра специальных гранулоцитов изменяет­ся в зависимости от возраста клетки. Редко появляющаяся в крови (только при патологических состоя­ниях) начальная форма — миэлоцит имеет округлое, реже с отдельными вдавленнями, ядро. В дальней­шем оно вытягивается («скручивается», по А. Н. Крю­кову) в сочное бобовидное или колбасовидное ядро (юная форма), а затем ещё более вытягивается и изги­бается то в форме изогнутой палочки, то подковы или буквы S. Это палочкоядерная форма. Наконец, ядро перекручивается и образует ряд сегментов (до­лек), связанных очень тонкими, иногда почти неза­метными нитями. Это полиморфноядерные или сегментоядерные формы. Так как первые исследователи не замечали перетяжек между сегментами и каждый сегмент принимали за отдельное ядро (Эрлих), то эти клетки получили сначала название полинуклеаров (многоядерных). В настоящее время их правильнее называют полиморфноядерными нейтрофилами. Опи­санный процесс изменения ядра наблюдался у свиньи, собаки и морской свинки.

У большинства сельскохозяйственных живот­ных процесс созревания сопровождается не сегмен­тацией ядра, а образованием колец и приводит к возникновению так называемых цепочкообразных и узловатых форм ядра. Это видно из следующего рисунка (рис. 2).

Ядро специальных гранулоцитов окрашивается интенсивно (особенно у молодых), с резким чередова­нием базихроматина и оксихроматина (тёмных и светлых участков). Поэтому у зрелых форм структура ядра грубая. В ядре относительно много базихро­матина (нуклеопротеидов и нуклеиновых кислот).

Специальные гранулоциты — это микрофаги И. И. Мечникова. Он объясняет перешнуровы­вание и сегментацию их ядра как специальное приспособление к диапедезу (миграции с проникновением через стенки капилляров). Именно поэтому они по­лучили название специальных гранулоцитов (А. Мак­симов).

Гетерофилы содержат оксидазу и протеолитические ферменты (трипсин). Но некоторым данным, содер­жание ферментов, особенно трипсина, увеличивается при преобладании в пище белков.

Количество специальных гранулоцитов в крови довольно велико и колеблется в зависимости от вида животного, его функционального состояния и забо­левания. Больше всего их у собак (60—70% всех лейкоцитов), меньше всего — у крупного рогатого скота (25—35%).

При патологических состояниях организма состав специальных гранулоцитов значительно изменяется. Резко уменьшается количество сегментоядерных кле­ток и нарастает количество палочкоядерных, юных и даже миэлоцитов, мобилизуемых из костного мозга в сосудистую кровь. Так как в самой левой графе лейкоцитарной формулы отмечаются наиболее моло­дые, в нормальной крови не встречающиеся клетки — миэлопиты, а все более взрослые формы — юные, палочкоядерные и сегментоядерные — размешаются в соответствующих графах все правее, то обогащение крови более молодыми формами получило название «сдвига ядра влево».

Регенеративный и дегенеративный сдвиги ядра. Различают два основных типа сдвига ядра: а) регене­ративный и б) дегенеративный.

а) Регенеративный сдвиг ядра выражает­ся в сдвиге ядра влево с увеличением в крови палочкоядерных, юных и даже миэлоцитов; обычно при этом наблюдается лейкоцитоз. Этот сдвиг и уси­ление лейкопоэза являются показателем раздраже­ния костного мозга, происходящего при его функ­циональной достаточности. Костный мозг, компенсируя гибель нейтрофилов в борьбе с инфек­цией, отдаёт в кровяное русло, наряду со зрелыми, всё возрастающее количество недостаточно зрелых форм, обычно не поступающих в сосудистую кровь.

б) При дегенеративном сдвиге общее часто уменьшается, отмечается нарастание палочкоядерных форм, в значительной степени дегенеративных без дальнейшего сдвига ядра влево. Дегенеративный сдвиг является показа­телем функциональной недостаточ­ности костного мозга, в котором наблюдается тканевая дегенерация.

Индексом сдвига ядра называется отношение (М+Ю+П)/С равное обычно для крови взрослой лошади (О+О+4)/50 = 4/50

Для крови верблюда он равен 12.5/38 , коровы 6/25 и свиньи 3/40 (по Сёмушкину и Домрачеву).

В легких случаях патологического процесса сдвиг ядра влево не идёт далее увеличения палочкоядер­ных и частично юных форм. Напротив, появление большого количества миэлоцитов и юных специаль­ных гранулоцитов в крови свидетельствует о тяже­сти заболевания.

При некоторых заболеваниях (особенно крове­творных органов) в крови появляются гигант­ские полисегментированные клет­ки. У некоторых животных, однако (например, у овцы), полисегментированные нейтрофилы находят­ся и в нормальной крови.

К дегенеративным изменениям специаль­ных гранулоцитов относятся: пикнотичность и при­чудливые, резко угловатые формы ядра, токсическая зернистость и многочисленные вакуоли в цито­плазме.

Особенно большое значение имеет токсиче­ская зернистость цитоплазмы. При обычной окраске растворами Гимза или Паппенгейма, мелкая в физиологической норме зернистость резко укрупняется, и зёрна часто сливаются в при­чудливую сеть (токсически изменённая зернистость). Для удобства дифференциации нормальной зерни­стости от токсической лучше применять окрашива­ние карболфуксинметиленовой синькой по Е. Фрейфельд. В этом случае физиологически нормальная зернистость гетерофилов почти не окрашивается, а патологическая резко выступает в виде фиолетово-синих зёрен или нитей и сеток на нежнорозовом фоне цитоплазмы. Можно также применять окраску по Гимза при кислой реакции воды (рН=5,4).

Вакуоли довольно часты в токсически изме­нённых или «старых» гетерофилах.

Иногда при инфекциях и интоксикациях в цито­плазме гетерофилов встречаются серо-голубые участ­ки в виде хлопьев или бляшек, так называемые тельца Дёле (Dohle). Это остатки базофильных участ­ков цитоплазмы раннего периода развития клетки.

Количество специальных гранулоцитов резко воз­растает в начальной стадии большинства инфекцион­ных болезней («нейтрофильная фаза борьбы»).

В. АГРАНУЛОЦИТЫ

IV. Лимфоциты

Лимфоциты являются типичными агранулоцитами, так как не содержат никакой характерной зернисто­сти в цитоплазме, 8а исключением изредка попадаю­щихся отдельных азурофильных верен. Клетки лим­фоцитов округлые, с круглым или овальным ядром, которое окружено или очень узким (малые лимфоци­ты), или более широким (средние и большие лимфо­циты) поясом цитоплазмы. Лимфоциты птиц и амфи­бий (лягушка) часто встречаются с зафиксирован­ными в момент передвижения псевдоподиями.

Диаметр малых лимфоцитов от 4,5 до 6,5 (л, средних от 6,5 до 10 р. и больших от 10,0 до 18,0 jx.

Цитоплазма лимфоцитов базофильна; при окраске по способу Паппенгейма имеет сетчатое строение, а окрашенная раствором Гимза — гомогенна. Цвет— от бледноголубого у больших и средних лимфоци­тов до синего у малых. Вокруг ядра заметна светлая, так называемая перинуклеарная зона. Последний признак помогает диференцировать больших лимфо­цитов от не имеющих этой зоны моноцитов. В некото­рых (преимущественно малых, иногда средних) лим­фоцитах в цитоплазме встречаются в очень небольшом количестве азурофильные зёрнышки (2—8). Крайне редко эти зёрна бывают очень крупными (до 2 ji в диаметре).

Цитоплазма малых лимфоцитов иногда видна лишь с одной стороны ядра в виде очень узкого, едва за­метного ободка (форма "серпа"). В некоторых клет­ках и этот серп незаметен, и тогда малый лимфоцит имеет вид «голого ядра».

Вообще по отношению к цитоплазме ядро лимфо­цитов велико, форма его круглая или овальная, осо­бенно правильная у малых лимфоцитов. Часто встре­чаются ядра с односторонним вдавлением, придаю­щим ядру форму боба (ридеровская форма ядра). Крупные лимфоциты иногда имеют ядро менее пра­вильной формы — угловатое, с выступами или вдав-лениями. В патологических случаях встречаются лимфоциты с неправильной лопастной формой ядра или расчленение ядра может напоминать сегменти­рованные ядра специальных гранулоцитов.

В строении ядра лимфоцитов характерно наличие темноокрашивающихся, неясноочерченных боль­ших глыбок базихроматина, со слабыми просветами между ними. Иногда это чередование тёмных глыбок с тонкими просветами придаёт ядру некоторое сход­ство с рисунком колеса, спицами которого служат светлоокрашивающиеся участки (А. Н. Крюков и др.). У малых лимфоцитов тёмные глыбки базихро­матина настолько сливаются, что структуру ядра установить трудно.

Ядро больших лимфоцитов более рыхлое и менее интенсивно окрашивающееся. В ядре крупных лим­фоцитов имеются не всегда ясно заметные 1—2 яд­рышка.

Лимфоциты содержат липазу и, повидимому, при­нимают известное участие в кишечном пищеварении (Синельников). Их базофильная, содержащая неко­торое количество нуклеотидов цитоплазма, проду­цирует значительное количество иммунных тел (Догерти и Вайт) (Dougherty, White) (1945 г.).

Наконец, лимфоциты участвуют в образовании, из белков плазмы крови, трефонов (Хрущев).

Лимфоциты составляют большинство клеток белой крови у крупного рогатого скота (50—60% всех лей­коцитов), свиней (45—60%), овец (55—65%), коз (40—50%), кур (45—65%) и кроликов (50—65%). У этих животных имеется так называемый лимфоцитарный профиль крови. У собаки и лошади количество лимфоцитов в крови меньше; там превалируют специальные гранулоциты. Однако и у этих животных число лимфоцитов остаётся довольно значительным (20—40% от всех белых кровяных телец).

Количество лимфоцитов в крови молодых живот­ных больше, чем в крови взрослых (за исключением первых дней после рождения). У низших позвоноч­ных количество лимфоцитов может быть относитель­но очень велико.

В клинике лимфоцитоз встречается в конце благо­приятно протекающего инфекционного заболевания («лимфоцитарная фаза выздоровления»). Лимфоци­тоз характерен для лимфатической лейкемии, встре­чается при инфекционной анемии у лошадей и неко­торых других заболеваниях.

V. Моноциты

Моноциты — большие клетки крови (от 10,0 до 20,0 µ в диаметре), большей частью округлой, иногда неправильной формы, с хорошо выраженной цито­плазмой, имеющей мельчайшую азурофильную зер­нистость, и большим, часто эксцентрически распо­ложенным ядром с бухтообразными вдавлениями и лопастями.

Мелкая азурофильная вернистость цитоплазмы почти не видна у моноцитов сельскохозяйственных птиц.

Цитоплазма моноцитов слегка базофилъна, голубовато-серого или пепельно-серого цвета («цве­та сигарного дыма») при окраске раствором Гимза п свинцово-серого пли грязноспнего цвета при окраске по способу Паппенгейма. Перинуклеарной зоны нет или она выражена очень слабо. По Крюкову, особенности окраски цитоплазмы моноци­тов зависят от того, что преобладающая в ней пара-плазма методом Паппенгейма красится частью в синий цвет, частью в розовый, причём в некоторых клетках превалирует синяя субстанция при почти полном от­сутствии розовой, в других обилие розовой субстан­ции оставляет явственный, своеобразный . отпеча­ток на морфологическом облике клетки, придавая её протоплазме фиолетово-синий или серо-фиоле­товый тон.

У птиц цитоплазма моноцитов серовато-голубая и мало отличается от цвета цитоплазмы лимфоци­тов.

Азурофильная зернистость моно­цитов хорошо выявляется при окраске по Паппенгейму и с трудом, только при длительной и очень хоро­шей окраске, — по Гимза. Зернистость розово-крас­ная, очень мелкая, пылевидная.

Ядро сравнительно велико, обычно образует выступы (лопасти) и бухтообразные углубления. Оно имеет очень нежную, тонкую структуру. Ядро моно­цитов амблиохроматично (бледно окрашивается), с широконитчатой, мягкой, «облачносливающейся», не­равномерной хроматиновой сетью. Интенсивность окраски ядра моноцитов гораздо слабее, чем у лим­фоцитов.

Моноциты — это типичные макрофаги И. И. Меч­никова. Они захватывают и переваривают остатки распавшихся клеток, попадающие в кровь, инород­ные частички, в том числе некоторые бактерии, и играют значительную роль в образовании иммунных тел.

В моноцитах имеется протеолитический фермент типа катепсина.

Нормальное количество моноцитов в крови млеко­питающих и птиц колеблется в пределах от 2 до 8%. Моноцитоз (повышенное содержание моноцитов) наб­людается в первую фазу выздоровления при большин­стве случаев инфекционных болезней («моноцитарная защитная фаза, или фаза преодоления»), при инфек­ционной анемии лошадей, протозойных заболева­ниях и большинстве других инфекционных болезней. По Н. М. Николаеву, однако, моноцитоз при заболе­ваниях далеко не всегда благоприятный признак, знаменующий собой начало выздоровления.

Плазматические клетки (клетки раздражения)

Плазматические клетки (клетки раздражения) ха­рактеризуются одним общим для них признаком — резкой базофилией цитоплазмы (ультрамариновый цвет). Иногда в цитоплазме видны вакуоли. Эта весьма немногочисленная группа кле­ток имеет полифилетическое, главным образом лимфоцитоидное или миэлоидное происхождение. В со­ответствии с этим, ядро клеток Тюрка имеет струк­туру, соответствующую структуре ядер тех клеток, из которых они возникли, но окраска его всегда отно­сительно темнее. Форма ядра — круглая или оваль­ная. Правильные глыбки хроматина придают ядру пятнистый и несколько пикнотический характер.

Вокруг ядра обычно хорошо заметна перинуклеарная зона, периферический же слой цитоплазмы окра­шен в интенсивносиний (ультрамаринового оттенка) цвет. Форма клеток — овальная, иногда сильно вы­тянутая или полигональная, реже круглая. Располо­жение ядра обычно эксцентричное. Структура цито­плазмы волокнистая или комковатая.

Из плазматических клеток могут возникнуть резко отличные от них по виду дегенеративные формы. В протоплазме плазматических клеток, утрачивающей базофильность, появляются крупные эозинофильные гранулы, вначале имеющие игольчатую форму. Ядро пикнотизируется, и клетка распадается. Гранулы распавшихся клеток, проникшие в соединительную ткань, называются русселевскими тель­цами.

Плазматические клетки в крови млекопитающих в заметных количествах встречаются только при па­тологии. Ими характеризуется так называемая «пё­страя картина крови». У сельскохозяйственных птиц они имеются и в нормальной крови (у кур 0,1 %, по Лебедеву, у гусей до 1,5%, по Домрачеву).

КЛАССИФИКАЦИЯ БЕЛЫХ КЛЕТОК КРОВИ ПО Н. М. НИКОЛАЕВУ

Описанная до сих нор классификация лейкоцитов основывается, главным образом, на их морфологии, так как современное состояние наших знаний о фи­зиологии белых кровяных клеток недостаточно для составления обоснованной функциональной класси­фикации лейкоцитов. Однако некоторые попытки в этом отношении имеются.

Одной ив таких попыток является классификация лейкоцитов Н. М. Николаева. Он рассматривает зер­нистость белых кровяных клеток как момент, тесно связанный с их функцией. Хорошо выраженная зер­нистость — признак высокой реактивности клеток мезенхимы.

Соответственно этому основному положению, Н. М. Николаев выделяет пять групп лейкоцитов:

I группа А

эндотелий

I группа моноцит

гистиоцит

миэлобласт

I группа Б

промиелоцит

миелоцит

I группа юный нейтрофил (гетерофил)

I группа В

Палочкоядерный нейтрофил (гетерофил)

II группа { сегментоядерный нейтрофил (гетерофил)

III группа { эозинофил одно- и двуядерный

IV группа { базофил

 V группа А

Лимфобласт

Клетки раздражения

V группа Эритрогоний

Эритробласт

Нормобласт

V группа Б

Лимфоцит

К первой группе Н. М. Николаев относит исходные (материнские) клетки и близкие к ним; ко второй — сегментоядерные и нейтрофилы (зрелые микрофаги); к третьей — клетки фагоцитировавшие (Н. М. Нико­лаев считает, что зёрна эозинофилов — это остатки поглощённых эритроцитов); к четвёртой — дегене­ративные клетки и, наконец, к пятой — так называе­мые синтетические клетки, образующие или гемогло­бин (эритробласты), или глобулин (лимфоциты).

В качестве принципиально новой клеточной формы среди агранулоцитов Н. М. Николаев выделяет так называемый гистиоцит или микромоноцит. При окраске раствором Гимза он может быть отличен от лимфоцитов по таким признакам (цитируем по Н. М. Николаеву):

Лимфоцит Узкий пояс протоплазмы Интенсивная базофилия протоплазмы Гомогенная или грубозерни­стая протоплазма Азурчфильные зёрна редки или единичны Темнофиолетовая окраска ядра Густое пикнотрчное ядро, иногда глыСчатое Перинуклеариая зона во­круг ядра

Гистиоцит Более широкая протоплазма Светлоголубая или серова­тая протоплазма Сетчатая или вакуолизиро-ванная протоплазма Большей частью азурофиль-ные зёрна Более светлая окраска ядра Более равномерное, менее плотное ядро Перинуклеарная зона часто отсутствует

В ряде случаев такое выделение гистиоцитов начи­нает проникать в практическую медицину и ветери­нарию.

 

РАЗМЕРЫ ЛЕЙКОЦИТОВ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

Видовые различия в величине белых кровяных те­лец незначительны. Ниже приводится таблица диа­метров эритроцитов, лейкоцитов и кровяных пла­стинок у сельскохозяйственных и лабораторных животных.

Размеры (диаметры в µ) кровяных клеток у лабораторных и сельскохозяйственных животных

 

ЛЕЙКОЦИТАРНАЯ ФОРМУЛА И ЛЕЙКОЦИТАРНЫЙ ПРОФИЛЬ КРОВИ

Количественный и качественный состав крови за­висит от функционального и патологического состоя­ния организма. Сложные биохимические и физиоло­гические изменения, происходящие в организме при различных патологических состояниях, изменяют функциональное состояние гемопоэтической си­стемы, а стало быть, и состав крови. Эти влияния изу­чены в совершенно недостаточной степени. Решающая роль здесь, несомненно, принадлежит изменению ха­рактера обмена веществ в самих периферических тканях. Некоторое представление об этом даёт схема взаимоотношений кроветворных органов с железами внутренней секреции, в основном заимствованная у Н. М. Шустрова и X. X. Владоса (1930 г.) (рис. 3).

Известно также влияние нуклеиновокислого нат­ра, вызывающего лейкоцитоз. Несомненное, хотя и мало изученное, влияние на кроветворение оказывает активная реакция ретикулоэндотелиальной системы тканей внутренней среды.

При патологическом раздражении вегетативной нервной системы наблюдаются две фазы лейкоцитоза: 1-я фаза — лейкоцитоз с миелоидной тенденцией, сочетающийся при болезни с усилением лихора­дочного состояния, обмена веществ, ускорением рас­пада белков, повышением содержания сахара и паде­нием содержания холестерина в крови и ацидозом,—преимущественно симпатикотония; 2-я фаза — лейкопения с лимфати­ческой тенденцией, эозинофилия, ослабление лихо­радки и обмена веществ, замедление распада бел­ков и вообще явления, противоположные наблю­дающимся в 1-й фазе, преимущественно ваготония. Влияние блуждающего нерва на эозинофилню уста­новлено с достаточной достоверностью, так же как влияние симпатического на нейтрофилию.

На гемопоэз влияют следующие основные гумо­ральные факторы:

а) продукты распада красных кровяных телец и,
возможно, лейкоцитов — стимулирующе;

б) щитовидная железа — стимулирующе;

в) печень — стимулирующе;

г) половые гормоны: андроген — стимулирующе— и эстроген — угнетающе (это установлено только для кролика);

д) ряд витаминов группы В, прежде всего фолеивая кислота, — стимулирующе;

е) токсины микроорганизмов, особенно патоген­ных, и продукты их распада (действие неоднозначное и диференцированное по отношению к различным видам кровяных клеток);

ж) гуморы: ацетилхолин, адреналин (влияние мало изучено);

з) антианемический фактор желудка — стимули­рующе (П. А. Троицкий и др.);

и) гормон селезёнки — угнетающе.

Под воздействием этих гуморальных факторов количественный и качественный состав крови свое­образно меняется. Однако следует иметь в виду, что картина крови oтражает (и то не всегда прямо) функ­циональное состояние лишь кроветворных органов, а не организма в целом. При этом токсины, действую­щие, например, на нервную ткань, могут не оказывать существенного влияния на систему кроветворения, и наоборот. Очевидно, при различных заболева­ниях состав крови может быть одинаковым, и, наобо­рот, одно и то же заболевание, в зависимости от функ­ционального состояния кроветворных органов, может дать различные картины крови. Поэтому Е. Фрейфелъд (1948 г.) считает, что при пользовании лейко­цитарной формулой нужно руководствоваться сле­дующими положениями: 1. Так как кроветворная система является для организма очень важным органом, то необходимо знать, как она функционирует, точно так же, как необходимо знать функции сердца, почек и т. п.

2. По крови мы устанавливаем функциональную диагностику кроветворной системы, некоторые функ­ции которой вам известны, других же мы не знаем.

3. Ввиду того, что некоторые заболевания дают резко выраженный различный морфологический со­став крови возможно исследованием крови исключить одно заболевание и высказаться в пользу дру­гого.

4. Так как кровяные клетки постоянно сменяются новыми, то в случаях, когда они выявляют морфоло­гически действие токсина (токсичность лейкоцитов, различные степени созревания — сдвиги), можно легко проследить, когда действие токсина прекра­щается, и, наоборот, выявить его, как только оно по­является.