Ядерный белковый матрикс(ЯБМ)

7. Ядерный белковый матрикс(ЯБМ)

-белковый компонент, "держащий" структ.ядра

-ДНК имеет участки, взаимод.с ЯБМ специфич.образом

-экстркция ядерных компонентов в процессе выделения ЯБМ:(пс.этих действий ядро не теряет своей целосности)

--0.2 мМ MgCl2-связать белки(чтобы сохранить матрикс),

--2M NaCl-гипотонич р-р(для удаления всех гистонов),

--1% тритон Х100(неионный детергент)-разрушение ядерной оболочки,

--ДНК-аза и РНК-аза-отщепление ДНК и РНК.

-ЛАМИНА(Л)-подстилает внутр.мембрану яд.оболочки

-белки,вход.в состав Л:ламины А,В,С

-Л соединяет яд.оболочку и конденс.Х

-ЯБМ=(Л)+остатки ядрышка (белковый матрикс) +поровые комплексы+ (межхроматиновая белковая сеть матрикса) (Збарский,Ченцов,Георгиев)

-ЯБМ-не артефакт,т.к.связь с ДНК-специфич.и функц.

-Состав ЯБМ:

--белок97,ДНК0.1,РНК1.2,фосфолипиды1.1(крысиная печень)

--белок92.3,ДНК1.2,РНК0.05,фосфолипиды6.9(HeLa)

---ДНК: 10000 нукл.посл.- сателлитные,120-140-гетерогенные

---РНК: гетерогенно-ядерная, рРНК, тРНК, малая ядерная

-транскрипция связана с ЯБМ(располагает участки Д/РНК опр.образом)

-Сущ. артефакт-белковый остов внутри хр-мы(scafull)-он обнаруживается только тотально(т.е.только из белков)

11. Док-ва непр-сти хр-м в течние клеточного цикла

В интерфазном ядре не видно хр-м, подобных митотическим (они там есть).

1.  Наблюдения Бовери(1907) за морф. постоянством хр-м при делении бластомеров аскариды→хар-р распол-я хр-м в телоФ опр-т форму интерфазного ядра и порядок распол-я хр-м в след. профазе (это посл.основой для теории↑).

2.  (косв)Пост-во ч-ла и морфологии хр-м для данного кариотипа нельзя объяснить при «разборке» хр-м.

3.  Закономерно повт-ся расположение хр-м в метафазных пластинках

4.  Правило Тейлора(1964)→воспроизв-е хр-м сходно с полуконсервативной редупликацией ДНК (метка Н³Т сохр-ся в одной хр-ме пс. деления).

5.  Индивид. хр-мы иногда можно наблюдать в интерФ-х ядрах(тельце Барра).

6.  В ряде объектов возм. выявление теломерных уч-ков хр-м в интерФ-х ядрах(хромоцентры итерФ-х ядер клеток меристемы корешков лука-теломерные уч-ки хр-м--радиоавтограф)

7.  Центромерные уч-ки хр-м в интерФ-х ядрах выявл-ся диффер. окраской на гетерохроматин(культура фибробластов мыши).

8.  Зоны локализации отд. хр-м можно выявить и в интерФ-х ядрах, не имеющих хромоцентров или конденсрованных уч-ков хр-м.(импульсная Н³Т метка в среде пс. делений располагается не диффузно, а над опр уч-ками)

9.  Изучение репаративного синтеза ДНК при УФ-облучении клеток→не > ½ хр-м клетки облуч-ся перед делением, облученная клетка поглощает Н³Т до синт. периода , т.к. репартивный синтез, причем ввключ-я неравномерно, в соотв с пораж. хр-мами.

10. Прямые биохим данные: при опр-и мах М ДНК дрозофиллы→1хр-ма–1ДНК, длина-const в митозе и интерФ

 

 

 

 

 

 

14. Клеточный цикл, его стадии и способы изучения

-время сущ-я кл.как таковойот деления до деления = клет.цикл (бактерия-20мин, стентор-2-3сут.)

-смысл кл-ного деления - в равномерном распр-и редуплиц. кл-ного мат-ла по 2м новым клл.

→G1→S→G2постсинтетич/премитотич{→G0 Ф пролиферативного покоя, откр. Lagta-R2}→ M{→G0-R(est)1} →G1пресинтетич/постмитотич→

--продолжительность ФФ сильно варьирует у разл.клл, но ~ одинакова у клл. 1 органа

-разл.содерж-е Д/РНК и интенс-сть их синтеза (по ФФ):

G1 - 2c(ДНК), S↑(РНК),S(1/4→1)max(белок)

S - (2→4)c, S(ДНК), Smax(РНК),Smax(белок)

G2 - 4c, Smax(РНК), S(1/4→1)max(белок)

M - (4→2)c, 1/4Smax(белок)

-G1-рост кл., подготовкак синтезу ДНК(синтез белка-инициатора S?), синтезы ферментов метаболизма РНК и белка, ферм.,необх для обр-я ДНК

-S –етсь всегда(искл.-2е деление мейоза), длительность ~v репл.ДНК(ч-лу репликонов), v(полипл.)=v(дипл.); синтез гистонов в цитопл., синтез рРНК(необх в G2)

-G2 –обычно короче ост.периодов, м. Выпадать; синтез кл-ных РНК и белков, синтез иРНК (для М), рРНК из S исп-ся для синтеза «белков деления»(напр.тубулинов для М веретена)

-G0 –дифф.клл, либо “в покое”(могут делиться)

-способы изуч-я:

1)метод получения гетерокарионов (с помощью инактивированных вирусов) из 2х разл клл.=> индуцированное влияние со ст-ны цитоплазм факторов

2) включение Н3-предшественников (синтезов Д/РНК)

{М-деление, ост. -интерФ}

15. Мейоз(МЗ), последовательнось фаз мейоза и его значение

-МЗ-2 клет.цикла, клл.делятся, но репл-ся только 1 раз

-процесс МЗ-а универсален для всех ЭУ орг-мов

-одна из специализаций- пол.клл., команда – оч.рано (циклоп-пс.4го деления, дрозофилла – ранняя бластула, ч-к – до заклкдки всех органов - в каудальном отделе)

-Август Вейсман: (для пол клл.) 1е делелние МЗ 2n→{S}→4n→{ProI(длинная профаза)}→{MI}→2*2n→ {нетS}→2*2n→{MII}→4*n (единица репл.–хр-ма)

--первичн.зарод.клл. →гонии→ауксоциты→(синапсис) →мейотич.деление→гаметы(рост ооцита, дифф. сператоцита)

--обр-е зиготы: ♀(1n)+♂(1n) →2n→(S)→4n→(M) →2*2n

-ProI сост.из неск.уч-ков:

1) лептотена(тонк.нить); «хр-мный букет»

2) зиготена(соед.нить); объед.матер. и отцовск.(1-1)

3) пахитена(толст.нить); длинная у ч-ка и мыши, обр-ся синаптинемный комплекс(характ для МЗ, 0.6 Σt)

4) диплотена(двойная нить); центромерные уч-ки отталкиваются , связь - хиазмы

5) диплокинез(расхождение хр-м);

-МЗ(отличия от М):

1) ProI – длительная (сом.0.5-1.5ч, пол.-до 50 лет)

2) многофазность

3) коньюгация хр-м(рекомбинация) – кроссинговер в местах хиазм, “обмен кусочками” в тетраде, между сестринскими невозможен

4) активация транскрипции (в М синтез РНК резко падает, в МЗ - всплеск)

5)синтез ДНК (отложенный=задержанный)-(заполнение пробела, v синтеза ДНК различна для 2х нитей )

6) диплотенная хр-ма – ст.”ламповых ёршиков”

“ёршик” обр. петля ДНК, на к-рой идет синтезРНК