Раствор люголя

2. Раствор люголя.

3.96° спирт.

4. Водный раствор карболового фуксина.

Ход исследования.

На фиксированный препарат кладут полоску фильтровальной бумаги и наливают раствор генцианвиолета. Красят 1,5 - 2 минуты.

Бумажку сбрасывают и заливают препарат раствором Люголя на 2 мин.

Раствор Люголя сливают и прополаскивают препарат в спирте до сероватого цвета.

Промывают водой и окрашивают водным раствором карболового фуксина.

Промывают водой, высушивают препарат на воздухе и микроскопируют.

Исследовать содержимое влагалища взрослой женщины на гонококки нецелесообразно из - за обилия бактериальной флоры. Основная локализация гонореи - мочеиспускательный канал и канал шейки матки.

У маленьких девочек вследствие незрелости плоского эпителия, покрывающего влагалище, гонококковая инфекция проявляется в виде вульвовагинита.

При микроскопическом исследовании выделений в случае острой гонореи в препарате обнаруживаются расположенные преимущественно внутри нейтрофильных гранулоцитов, сгруппированные в шахматном порядке гонококки в случае хронической - приемущественно внеклеточно расположенные.

При хронической гонорее могут появляться дегенеративные формы гонококков. В первой стадии дегенерации наблюдаются слабоокрашенные микро - и макроформы гонококков; во второй - они теряют свою типичную почковидную форму и становятся полукруглыми; в третьей - они округляются в виде шарообразных диплококков; в четвёртой стадии - сжимаются в виде отдельных точек.

Для типичной гонореи в стадии обострения характерно наличие большого количества нейтрофильных гранулоцитов; гонококки расположены как внутри их, так и внеклеточно. Другой бактериальной флоры нет.

При латентно протекающей хронической гонорее много нейтрофильных гранулоцитов. Гонококки и другие микроорганизмы отсутствуют.

Наличие большого количества нейтрофильных гранулоцитов с полуразрушенными, дегенеративно изменёнными ядрами и цитоплазмой, палочек Дедерлейна и обилие банальной микрофлоры для гонореи нехарактерно, а после её лечения может служить признаком выздоровления.

Согласно приказу МЗ СССР № 936 от 12 июля 1985 г." Об унификации лабораторных методов исследования в диагностике гонореи и трихомониаза ", используются следующие методы выявления гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале.

Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном метиленовым синим.

Реактивы.1.1% водный раствор метиленового синего;

2.96° этиловый спирт.

Оборудование: микроскоп с осветителем, песочные часы, штативы.

Приготовление препаратов. Материал наносят на чистые обезжиренные предметные стёкла тонким равномерным слоем, высушивают на воздухе.

Окраска. Препарат фиксируют 3 минуты в 96° этиловом спирте, высушивают и наносят на 1 мин 1% раствор метиленового синего, после чего тщательно смывают оставшийся краситель водой и высушивают в штативе.

Микроскопия. Исследование проводят с естественным или искусственным освещением (объектив 90 х иммерсионный, окуляр 7 х или 10 х; иммерсионное масло - кедровое).

Ядра клеток окрашены в синий цвет, протоплазма - в голубой различной интенсивности. Гонококки темно - синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, парные; располагаются внутриклеточно, в слизи и на эпителиоцитах.

Влагалищные трихомонады отличаются полиморфизмом (округлые, овальные, полигональные), расположены в слизи, между клеточными элементами; у них четко видна оболочка; ядро расположено эксцентрично и интенсивно окрашено в синий цвет, цитоплазма нежная, сетчатая, светло - синяя; вакуоли бесцветны.

Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном эозином и метиленовым синим.

Реактивы.1.1% раствор эозина в этиловом спирте.

2.1% водный раствор метиленового синего.

Окраска. Без предварительной фиксации препараты погружают на 10 - 15 с в 1% раствор эозина, смывают струёй водопроводной воды и заливают 1% раствором метиленового синего на 1 - 2 мин, затем тщательно смывают оставшийся краситель водой, и высушивают в штативе.

Окраска этим методом предусматривает выявление, наряду с гонококками и влагалищными трихомонадами и эозинофильных гранулоцитов.

Микроскопия. Препарат синего цвета: ядра клеток окрашены в синий, цитоплазма - в голубой цвет различной интенсивности. При наличии эозинофильных гранулоцитов в цитоплазме имеется зернистость красного или ярко - розового цвета. Слизь голубого цвета. Бактериальная флора окрашена в синий цвет различной интенсивности. Гонококки темно - синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, парные; располагаются внутриклеточно, в слизи и в эпителиальных клетках.

Влагалищные трихомонады: ядра овальные, синего цвета, расположены эксцентрично, цитоплазма чётко очерчена, сетчатая, светло - синяя; вакуоли бесцветные.

Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном бриллиантовым зелёным.

Реактивы.1.0,5% водный раствор бриллиантового зелёного.

2.96° этиловый спирт.

Окраска. Препарат фиксируют 3 мин в 96° этиловом спирте, высушивают, наносят 0,5% раствор бриллиантового зелёного на 1 мин. Затем тщательно смывают краситель под струёй холодной воды и высушивают в штативе.

Микроскопия. Препарат зелёного цвета: ядра клеток окрашены в зелёный цвет, цитоплазма - в светло - зелёный. Слизь зелёного цвета. Бактериальная флора окрашена в зелёный цвет различной интенсивности. Гонококки тёмно - зелёного цвета, чётко очерчены, бобовидной формы, парные, располагаются внутриклеточно, в слизи и на эпителиальных клетках. Влагалищные трихомонады с чёткой оболочкой, полиморфные (округлые, овальные, полигональные), расположены между клеточными элементами или в слизи. Ядро интенсивно окрашено в зелёный цвет, расположено эксцентрично. Цитоплазма сетчатая, светло - зелёного цвета; вакуоли бесцветные.

Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном по модифицированному способу Грамма.

Метод основан на свойстве гонококков, влагалищных трихомонад и других грамоотрицательных микроорганизмов отдавать основной фиолетовый краситель при обесцвечивании на протяжении определённого времени в этиловом спирте и на свойстве докрашиваться в дальнейшем дополнительным оранжево - красным красителем.

Реактивы.1.1% водный раствор кристаллвиолета.