Навигация
1.1 Прогестерон
Для оценки фертильности в полевых условиях наиболее типична проблема отбора проб. Соответствующий химический маркер должен находиться в легкодоступной жидкости, которая требует лишь минимальной предварительной обработки или вообще не нуждается в ней. В настоящее время для контроля репродуктивного цикла коров чаще всего используют прогестерон. Концентрация последнего в периферической системе кровообращения животных относительно низка во время овуляции, затем постепенно возрастает до максимума. Между 17 и 20 днями после последней течки количество прогестерона в плазме быстро падает, что указывает на начало следующего цикла созревания яйцеклетки. Типичные изменения концентрации прогестерона в плазме коров представлены на рис. 1. Если животное становится стельным, то высокая концентрация гормона сохраняется.
Оказалось, что концентрация прогестерона в периферической системе кровообращения и в молоке коров изменяется параллельно; следовательно, отбор проб крови и последующее выделение сыворотки или плазмы не обязательны. Зауэр и др. впервые разработали методику типа ИФА для определения прогестерона в коровьем молоке. В этой методике использовались иммобилизованные на твердой фазе антитела и конъюгат прогестерона. На базе этого метода разработан иммунохимический набор для определения фертильности крупного рогатого скота в полевых условиях.
Фирмой Cambridge Veterinary Sciences разработан и налажен промышленный выпуск надежного, полностью укомплектованного набора реагентов Ovucheck Cowside™, предназначенного для определения уровня прогестерона в коровьем молоке на месте отбора проб. В этом наборе используются микротитровальные полоски с предварительно адсорбированными в их лунках моноклональными антителами к прогестерону. Анализ выполняется менее чем за 45 мин. Потребителю необходимо только добавить определенное количество пробы или стандарта в соответствующее число используемых лунок. Затем в лунки с помощью капельницы добавляют конъюгат прогестерона с щелочной фосфатазой. Содержимое лунок осторожно перемешивают и инкубируют при комнатной температуре 15 мин. Затем реакционную смесь сливают, и в лунках остается только связанный с антителами меченый антиген. Далее во все лунки с пробой, стандартом и контрольным образцом добавляют раствор субстрата. Набор оптимизирован таким образом, что он позволяет визуально различить концентрации прогестерона от 2 до 10 мг/мл. Интенсивно розовая окраска указывает на то, что животное находится в состоянии овуляции. Пробы с повышенным уровнем прогестерона дают легко различимую светло-розовую окраску. Связь между визуальной оценкой результатов анализа и оптической плотностью продуктов ферментативной реакции при 540 нм представлена на рис. 2. На рис. 3 показан внешний вид набора. Этот пример показывает, как обычную методику типа ИФА можно оптимизировать, подобрав соответствующие стандарты, антитела, метку и субстрат, и таким образом создать набор, пригодный для надежного определения гормона в полевых условиях.
Существует множество наборов, представляющих собой варианты Ovucheck Cowside; основой большинства из них является ИФА. Соответствующие методики могут заметно различаться в деталях. Для количественного определения прогестерона в молоке предлагались, например, в качестве твердой фазы для иммобилизации антител полимерные палочки. Разрабатывается ряд методик типа ИФА для определения концентрации прогестерона в плазме, предназначенных для определения репродуктивного статуса крупного рогатого скота, лошадей и свиней.
1.2 Сульфат эстрона
Сульфат эстрона представляет собой сульфопроизводное стероида; он секретируется в относительно большом количестве фетоплацентой. Концентрация этого соединения в крови или молоке коров и свиней является надежным показателем фертильности. Определение концентрации Oe1-3-S дополняет результаты определения прогестерона у элитных животных. Разработано несколько методик ИФА для определения Oea-3-S в молоке и сыворотке коров. Так как молекулярная масса Oe1-3-S невелика, его иммунохимическое определение возможно только с помощью конкурентных методов иммуноанализа. В настоящее время наборы для определения Oe1-3-S промышленностью не производятся.
1.3 Сывороточный гонадотропин жеребых кобыл
Сывороточному гонадотропину жеребых кобыл также уделялось большое внимание как потенциальному диагностическому маркеру. Поскольку PMSG представляет собой смесь белков, то для измерения концентрации этого гормона в сыворотке лошадей можно использовать неконкурентный иммуномстрический анализ. Фирма Monoclonal Antibodies Inc. разработала набор Marecheck, позволяющий определить PMSG в течение 30 мин. В этом наборе антитела иммобилизованы на специальной палочке, которую после реакции с определяемым веществом помещают в раствор меченных ферментом антител против другого эпитопа. Палочку промывают и погружают в раствор субстрата; результаты ферментативной реакции оценивают визуально.
Похожие работы
... электрода, обусловленное адсорбцией белков, и перекрестные реакции антител практически не влияют на результат анализа. Неферментативные электроактивные метки. Многообещающим направлением в амперометрическом иммуноанализе представляется применение металлсодержащих соединений. К таким меткам предъявляются следующие требования: 1) хорошие электрохимические свойства, 2) нечувствительность к рН в ...
... результат можно получить через 1-2 часа после начала исследования при концентрации вибрионов не менее 106 клеток в 1 мл., поэтому рекомендуется предварительно подращивание материала на питательных средах. Экспресс-диагностика туляремии Возбудитель туляремии (Туляре - район Калифорнии) - Franciella tularensis относится к роду с невыясненным положением в систематике микробов. Этиологическая природа ...
... зондирование нельзя отнести к методам иммунохимического анализа, основной его принцип (взаимодействие комплементарных структур) методически реализуется теми же способами, что и индикаторные методы иммунодиагностики. Кроме того, методы генного зондирования позволяют восполнить информацию об инфекционном агенте в отсутствии его фенотипической экспрессии (вирусы, встроенные в геном, «молчащие» гены ...
0 комментариев