Краткие исторические сведения о грибковых заболеваниях

1. Краткие исторические сведения о грибковых заболеваниях

Грибковые заболевания были известны человечеству очень давно. Академик О.Н. Подвысоцкая различала 3 периода в истории наших знаний о грибковых заболеваниях.

Первый период, так называемый описательный, начинается с глубокой древности (Гиппократ, Цельс) до середины XIX века. Начало изучения микозов в медицине относится к античной эпохе. Молочница была описана Гиппократом и Галеном, фавус (парша) и инфильтративно-нагноительная трихофития - Цельсом, а современное название дерматофитий (tinea) появилось в древнем Риме, когда были открыты первые возбудители грибковых заболеваний. В 1842 г. был описан возбудитель поверхностной трихофитии и микроспории. В 1846 г. - возбудитель разноцветного лишая.

Второй период в истории грибковых заболеваний простирается с половины до конца XIX века, чему способствовало изобретение микроскопа, развитие ботаники, а затем микологии. В этот период были открыты новые виды грибов: в 1839г. - гриб возбудитель фавуса, в 1842г. - поверхностной трихофитии и микроспории, в 1846 г. - возбудители разноцветного лишая, актиномикозы (1892) и бластомикозы (1894). Изучалась и описывалась вызываемая ими клиническая картина, производились поиски наиболее пригодных для роста грибов питательных сред, чем было положено начало изучения возбудителей гриба всех заболеваний в культурах (1899 г., Сабуро). На рубеже XIX-XX вв. были описаны почти все основные микозы человека и их возбудителей. Русский ученый Верюжский один из первых на основании многочисленных посевов грибов на питательных средах доказал, что грибковые заболевания вызываются различными грибами. Труды Верюжского имели исключительное значение для решения вопроса об этиологии грибковых заболеваний и для полного разгрома унитарной теории.

Третий период простирается с конца XIX столетия до настоящего времени. В этот период обращают на себя внимание работы по изучению токсинов грибов и иммунитета, а также серология грибковых заболеваний, вопросы их лечения, изучение которых привело к расширению арсенала лечебных средств.

Ведущее место в этот период заняла наша отечественная дерматология, представленная такими учеными как Павлов С.Т., Поспелов А.И., Никольский Н.В., Фридман Е.Ф., Богров С.Л., Черногу-бов Н.А., Картамышев А.И., Боголепов А.А., Подвысоцкая О.Н., Аравийский А.Н., Чубарова А.С., Ариевич A.M., Кашкин П.Н. и др.

Морфология грибов

Грибы являются растительными организмами. Наряду с водорослями они относятся к низшим растениям и отличаются от последних тем, что не содержат хлорофилла и не ассимилируют углерода.

Возбудители патогенных грибов (они изучены под микроскопом) состоят из нитей различной длины и толщины, называемых гифами. Иногда они переплетаются между собой наподобие войлока. Сплетение нитей, или гиф, составляет вегетативное тело гриба и называется мицелием или грибницей. Нити мицелия могут разделяться поперечными перегородками на отдельные членики (клетки), как это наблюдается, например, у грибов - возбудителей трихофитии, в этом случае мицелий называют септированным. В других случаях поперечные перегородки могут отсутствовать -тогда нить мицелия представляется в виде одной разветвляющейся и разросшейся клетки, напоминающей собой полую трубку.

Нити мицелия имеют оболочку, которая состоит из целлюлозы, фунгина, хитиноподобного и кислотоупорного вещества. В оболочке мицелиальной нити заключена грибная протоплазма, состоящая из органических и неорганических веществ. В протоплазме имеются вакуоли и различные включения: жир, гликоген, пигмент, фиброзные образования, кристаллоиды и смолистые вещества. В протоплазме грибов заключены клеточные ядра в виде маленьких округлых образований неодинаковой величины, в которых наблюдаются явления митоза и прямого деления путем перешнуровки ядра. Химический состав грибов отличается большим разнообразием. Сюда входят органические соединения - углеводы, белки, жиры, растительные кислоты (щавелевая, лимонная, уксусная, муравьиная и др.), ароматические соединения, эфирные масла, алкалоиды (муска-рин, эрготин и пр.), глюкозиды, а также неорганические соединения - соли натрия, калия, фосфора, железа, серы и др. Кроме того, в вегетативных телах грибов нередко находятся пигментные вещества сложного химического состава, придающие колониям грибов фиолетовую, красную, золотисто-желтую и другую окраску. Для биохимической активности грибов характерна их способность выделять ферменты, расщепляющие белки и жиры, углеводы.

В зависимости от условий внешней среды, в частности питания, мицелий грибов может иметь разнообразную форму. В одних случаях на протяжении нитей мицелия образуются перетяжки, что делает их похожими на стебли тростника. У некоторых грибов окончания мицелия бывают в виде коротких и толстых ответвлений и напоминают собой канделябры или же образуют переплетения, имеющие сходство с рогами северного оленя. Указанные формы мицелия обнаруживаются, главным образом, в чистых культурах. Мицелий, обнаруживаемый в патогенном материале, представляется более однообразным. В лабораторной диагностике помимо обнаружения мицелия важными являются споры, которые, по определению акад. О.Н. Под-высоцкой и проф. П.Н. Кашкина, представляют собой «комочки сгущенной протоплазмы, заключенные в более плотную и резко конту-рированную, иногда двойную оболочку», т.е. морфологически споры являются образованиями, возникшими в нитях мицелия и отделившимися от них, - это клетки воспроизведения грибов, которые являются в то же время одной из стадий существования грибов и поддержания их биологического рода.

Размножение патогенных грибов происходит посредством спор, которые, будучи более устойчивыми, чем мицелиальные нити, образуются, главным образом, при неблагоприятных условиях для развития жизни грибов. Даже по истечении длительного срока споры, попав в благоприятные условия, могут прорастать и образовывать новый мицелий.

Возбудители грибковых заболеваний; представляют собой организмы, находящиеся в постоянном и тесном общении с внешней средой, ассимилируют вещества, необходимые для их жизни. К числу последних в первую очередь относятся углерод, азот, минеральные соли.

Большое значение для роста и жизнедеятельности грибов имеют белки и углеводы. Размножение углеводов обеспечивает потребность грибов в углероде. Из углеродов наиболее легко усваиваются грибами глюкоза, мальтоза, левулеза и др. Азот грибы усваивают из пептонов и аминокислот, а также из солей аммония. Из неорганических веществ для питания грибов необходимы соли калия, железа, марганца, фосфора и др.

Усвоение питательных веществ грибами связано с их ферментативной деятельностью. Большинство патогенных грибов способно вырабатывать ферменты, разрушающие тканевые элементы. Из них особое значение имеют протеолитические ферменты, в частности, диастаза, переводящая белки в пептоны, также липаза, эмульгирующая и омыляющая жиры. Липаза играет также существенную роль в патогенезе развития дерматомикозов, растворяя кожный жир и облегчая проникновение грибов в кожу. Реакция среды также имеет значение для роста и развития грибов. Еще Верюжский в своих работах показал, что колонии грибов лучше всего растут при слабокислой реакции среды. Однако границы кислотности среды, в которой могут расти грибы, колеблются в довольно широких пределах. Жизненный цикл грибов состоит из двух фаз или стадий: половой (репродуктивной) и бесполой (вегетативной). Половая стадия жизненного цикла грибов называется телеоморфой, бесполая - анамор-фой. Другим вариантом роста является почкование, когда происходит отделение дочерней клетки от материнской. В репродуктивной фазе тело гриба имеет сложное строение и состоит из дифференцированных клеток, имеющих специальные репродуктивные органы. Среди них выделяют структуры переживания, позволяющие переносить неблагополучные условия. Грибы размножаются при помощи спор. Споры образуются в результате простого митоза и мейоза. В первом случае тип спорообразования и стадия развития гриба называются бесполыми, а сами бесполые споры - конидиями. Во втором случае тип размножения называется половым, а само имя «споры» чаще применяется именно к половым спорам. Для многих плесневых грибов характерно наличие особых органов конидиогенеза (бесполого размножения). Отпочковывающиеся дочерние клетки дрожжевых грибов называют бластоконидиями.

Устойчивость грибов

Можно считать, что температурные границы роста грибов колеблются между 15° и 50° выше нуля. Наиболее благоприятной температурой для роста грибов является температура 25-30° выше нуля.

По данным A.M. Ариевича, П.Н. Кашкина и др. авторов солнечный свет задерживает рост дерматофитов, так ежедневное в течение одного часа освещение грибов солнцем ведет к гибели грибов, как в культурах, так и в патологическом материале.

Резистентность дерматомицетов в отношении химических веществ довольно высока. Известно, что после 10-минутного воздействия формалина (2%), двууглекислой соды (10%), карболовой кислоты (2,5 %), при воздействии в течение нескольких секунд раствором хлорной извести (0,5 %) наблюдается гибель грибов. Столь же эффективное действие оказывает настойка йода (10%), анилиновые краски - фукорцин, метил-виолет, бриллиантовая зелень (1-2 %), салициловая и бензойная кислота (1 %).

В патологическом материале, особенно в волосах, грибы могут сохранять свою жизнеспособность в течение длительного времени. Академик О.Н. Подвысоцкая указывает, что грибы в волосах сохраняют свои патологические свойства в течение одного года, а в ногтевых пластинках и чешуйках - от 4 недель до полугода. Встречаются отдельные указания на жизнеспособность патогенных грибов в течение 3-8 лет (Иткин, Малышев).

Как показывают исследования, жизнеспособность грибов объясняется наличием спор, устойчивых к внешним воздействиям, в то время как мицелии оказывается погибшим. Эта устойчивость спор в патологическом материале является чрезвычайно важным ' эпидемиологическим фактором. Существующее деление грибов на сапрофитов и условно-патогенных грибов представляется крайне условным. Поэтому следует выделить важные патогенетические факторы, способствующие переходу этих грибов в патогенное или, можно сказать, паразитарное состояние:

а) гипоавитаминозы,

б) эндокринопатии, особенно сахарный диабет,

в) дисбактериоз и другие заболевания желудочно-кишечного тракта,

г) состояние иммунодефицита, в частности ВИЧ-инфекция.

Методы диагностики грибковых заболеваний

1. Микроскопическое исследование представляет собой наиболее удобный и распространенный метод исследования на грибы. Для получения достоверных результатов исследования на грибы взятие материала рекомендуется производить до лечения. Материал для исследования берется с периферических мест, представляющих собою наиболее свежие очаги поражения. Чешуйки, волосы и ногти представляют собой более или менее плотное непрозрачное роговое вещество и поэтому должны подвергаться соответствующей обработке до микроскопического исследования. Только в результате обработки патологического материала происходит его расслоение с освобождением грибов, заключенных в ороговевших тканях, и просветление последних. Следовательно, создаются условия, благоприятные для обнаружения грибов. Наилучшим реактивом для просветления служит 30% раствор едкого калия или натрия. Чешуйки и ногти должны быть расщеплены на мелкие частицы. Волос разрезается на мельчайшие поперечные сегменты. Микроскопическое исследование патологического материала представляет собой наиболее удобный и распространенный метод исследования на грибы. Характерной особенностью элементов грибов является повышенная светопреломляемость, позволяющая хорошо отличать их от других микроскопических образований.

Мицелий грибов обнаруживается в препарате в виде длинных, извилистых, ветвящихся нитей. При этом часто можно видеть деление мицелия на членики (септированный мицелий) различной длины и ширины. Мицелий по форме и строению представляется своеобразным, что уже при незначительном навыке его не трудно дифференцировать от других образований. Обнаружение в препарате только одной нити мицелия позволяет во многих случаях подтвердить клинический диагноз грибкового заболевания. Труднее это сделать, когда в препарате обнаруживаются только споры, особенно в случаях их атипического расположения. В чешуйках и частицах ногтей грибы обнаруживаются в форме ветвящихся нитей мицелия и спор, располагающихся в виде цепочки. При этом определить вид гриба в подавляющем большинстве случаев не представляется возможным, так как различные виды грибов могут давать одинаковую микроскопическую картину. При наличии в препарате очень коротких нитей мицелия, с известной долей вероятности, можно предположить наличие возбудителя микроспории. Руководствуясь величиной спор, можно также говорить о крупноспоровой и мелкоспоровой трихофитии и микроспории.

Из всего сказанного следует сделать вывод, что при исследовании чешуек и частиц ногтей диагноз грибкового заболевания ставится на основании обнаружения мицелия или спор грибов. В ответе лаборатории должно быть указано: обнаружены или не обнаружены грибы.

При микроскопическом исследовании волос очень важно определить отношение гриба к нему. Элементы гриба - мицелий и споры - могут располагаться как на поверхности волоса (тип эктот-рикс), так и внутри его (тип эндотрикс). В первом случае элементы гриба, располагаясь на поверхности волоса, могут проникать в меньшем количестве внутрь его. По величине спор различают крупноспоровый и мелкоспоровый эктотрикс. При обнаружении мелких спор на поверхности волоса, покрывающих его на некотором протяжении подобно чехлу, возникает вопрос об отличии мелкоспоровой поверхностной трихофитиии от микроспории. При поверхностной трихофитии споры имеют одинаковую величину и форму, они располагаются в виде цепей по длине волоса При микроспории споры располагаются без какой-либо системы, наподобие мозаики. Мицелий и споры гриба могут располагаться внутри волоса (тип эндотрикс). Часто микроскопическая картина напоминает мешок с орехами. Роль последних играют споры, располагающиеся цепями по длине волоса (Trichophyton endothrix). Гриб - возбудитель фавуса - также располагается внутри волоса, но элементы его, в отличие от трихофитии, никогда не заполняют целиком вещества волоса и оставляют часть его неизмененной. Преобладают нити мицелия, спор в волосе обнаруживается мало. Кроме того, волосы, пораженные фавусом, содержат пузырьки воздуха

Таким образом, при микроскопическом исследовании волос выявляется отношение гриба к волосу, расположение гриба вне или внутри волоса, величина, форма и группировка элементов гриба. Более точный, исчерпывающий ответ может быть дан только на основании культурального исследования.

2. Культуральное исследование грибов. Культивирование грибов на искусственных питательных средах представляет собою широко распространенный метод изучения грибов. Подавляющее большинство питательных сред содержит углеводы и пептон, соотношение которых колеблется в довольно широких размерах в различных средах. Среда Сабуро (сахарный агар). Она состоит из мальтозы (глюкозы) 4,0; пептона 1,0; агар-агара 1,8; дистиллированной воды - 100 смЗ. Среда Сабуро Пользуется широкой известностью и распространением. Она дает хороший рост грибов, сравнительно легко приготавливается и не требует для своего приготовления сложных приспособлений. Выращивание грибов на питательных средах является распространенным методом исследования, обеспечивающим правильную диагностику грибковых заболеваний, определение вида грибов-возбудителей, а также выбор эффективных методов лечения и профилактических мероприятий. Оптимальная реакция питательной среды для выращивания большинства дерматофитов - слабокислая, она колеблется в пределах рН - 6,0-6,8. Наиболее благоприятные температурные условия для роста грибов в термостате колеблются между 25 и 28 градусами выше нуля.

Внешний вид культур в зависимости от вида грибов представляется весьма разнообразным. Патогенные грибы в зависимости от выделяемого пигмента могут окрашивать колонии в разные цвета. Фиолетовый трихофитон (Trichophyton violaceum) - возбудитель поверхностной трихофитии — получил свое название от характерного красновато-фиолетового пигмента, окрашивающего его колонии. Кроме того, культура фиолетового трихофитона имеет вид куполообразного возвышения округлых очертаний, поверхность культур носит матовый характер, реже она представляется маслянистой и покрыта складками.

Возбудители поверхностных дрожжевых дерматозов (кандидо-зов), грибы рода Candida, дают колонии различной формы и вида, имеют запах дрожжей. Определение их вида производится по способности вызывать брожение того или иного вида сахара.

Дерматофитозы

Микозы кожи, вызванные мицелиальными и дрожжеподобными грибами, называются дерматомикозы.

Микозы ногтей, вызванные мицелиальными и дрожжеподобными грибами, называются онихомикозы.

Микозы кожи и её кератин-содержащих придатков, вызванные дерматофитами, называются дерматофитозы или дерматофитии

Дерматомикозы и онихомикозы, кроме дерматофитов, могут быть вызваны следующими грибами:

• Дерматомикозы

1. Candida spp.

2. Fusarium moniliforme

3. Trichosporon beigelii

4. Hendersonula toruloidea

• Онихомикозы

1. Scopulariopsis brevicaulis

2. Acremonium sp.

3. Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. glaucus, A. teereus, A. versicolor

4. Fusarium oxysporum

5. Geotrichum candidum

6. Candida albicans

7. Hendersonula toruloidea

8. Cephalosporium sp.

Дерматофитозы (английские синонимы «tinea» или «ringworm») - это наиболее распространенные поверхностные микозы человека и животных, при которых поражаются кератиновые ткани кожи, волосы и ногти. Они вызываются группой родственных мицелиаль-ных кератинофильных грибов, имеющих общее название «дермато-фиты» и способных использовать кератин в качестве источника питания. К этой группе относят около 100 грибов, большинство из которых является почвенными кератинофильными грибами, но только 42 вида признано достоверно существующими и действительно связаны с микозами человека. Из них 11 видов наиболее распространены как возбудители дерматофитозов. Предполагается, что в процессе эволюции почвенные грибы адаптировались к определенным хозяевам и постепенно сформировали существующие группы антропо, зоо- и геофильных дерматофитов.

Несовершенные формы дерматофитов подразделяются на 3 рода:

1. Род Epidermophyton - продуцирует только макроконидии при отсутствии микроконидий. Включает 2 вида, один из которых патогенен для человека.

2. Род Microsporam - продуцирует микроконидии и шорехова-тые макроконидии. Описано 19 видов, из которых 9 вызывают инфекции людей и животных.

3. Род Trichophyton - продуцирует гладкостенные макроконидии и микроконидии. Включает 22 вида, преимущественно вызывающих инфекции человека и животных. Совершенные формы относят к роду Arthroderma гимноасковых.

Около 60% всех выделенных от людей видов составляет Т. rubrum, около 25 % Т. mentagrophytes, около 10 % - Т. verruco-sum и Т. tonsurans. Все остальные виды: Е. fioccosum, M. andonini, М. canis и другие - вызывает 1 %-5 % всех дерматофитозов.

Дерматофитозы

Источники инфекции и эпидемиология

Дерматофиты - единственная группа реально контагиозных грибов, т.е. способных передаваться от одних живых источников (люди, животные) к другим.

Превалирующие виды дерматофитов, вызывающие микозы кожи, различаются на различных территориях.

По естественному резервуару обитания и источнику инфекции для людей дерматофиты подразделяются на:

1. антропофильные, которые встречаются почти исключительно у людей, вызывают преимущественно мягкие, хронические инфекции;

2. зоофильные характерны для домашних и диких животных и птиц. У людей вызывают островоспалительные и быстро заканчивающиеся инфекции;

3. геофильные дерматофиты, имеющие своим резервуаром почву, вызывают островоспалительные ограниченные инфекции, как правило, спонтанно излечивающиеся.

Таблица 1 Экологическая классификация дерматофитов по их первичному резервуару

Антропофильные	Зоофильные	Геофильные
Повсеместно распространенные виды
T.mentagrophytes var. Interdigitale	Т. equinum (лошади)	Т. ajelloi
T. rubrum	T.mentagrophyte s var. men- tagrophytes (грызуны, кроли- ки, дикобразы)	Т. terrestre
Т. schoenleinii	Т. verrucosum (Kp. рог. скот)	M.fulvum
Т. tonsurans	М. canis (кошки, собаки)	M. gypseum
T. violaceum	М. equinum (лошади)	M. cookei
М. audouinii	M. gallinae (куриные)	Е. stockdaleae
Е. floccosum	М. nanum (свиньи)
	М. amazonicum
Географически ограниченные и редкие виды
Т. concentricum	T. simii (обезьяны)
Т. megninii	M. persicolor (грызуны)
Т. gourvilli	Т. erinacel (ежи, дикобразы)
Т. yaoundei	M. distartum (кошки, собаки)
Т.soudanense
М. ferrugineum
Т. raubitschekii
Т. kanei

Дерматофитозы встречаются во всем мире, а их частота, локализация и преобладание возбудителей зависят от экологических факторов, образа жизни и обычаев населения.

Повсеместно распространенны такие виды дерматофитов как T. Mentagrophytes, T. Rubrum, E. floccosan

Некоторые виды дерматофитов имеют ограниченное географическое распространение и эндемичны на определенных территориях. Так Т. soudaneuse, T. gourvilii и Т. yaoundi географически ограничены Центральной и Западной Африкой. М. feirugineum преимущественно распространен в Японии и окружающих её районах, Т. concentricum регистрируется на юге Тихого океана, в Центральной и Южной Америке.

Однако возрастающая мобильность населения приводит к изменению ареалов распространения дерматофитов. Например, Т. tonsurans вытеснил М. audouinii как основной возбудитель микоза волосистой части головы в США вследствие интенсивной миграции из Мексики и других Южно-Американских стран, где доминирует Т. tonsurans.

Дерматофиты распространяются путем прямого непосредственного контакта с инфицированным источником (человек, животное, почва) или путем непрямого контакта через инфицированные чешуйки кожи или волос (расчески, одежда, обувь, мебель, театральные кресла, головные уборы, постельное белье, полотенца, ковры).

В зависимости от вида дерматофиты могут сохранять жизнеспособность на предметах среды до 15 месяцев.

Патогенез дерматофитозов

Дерматофиты колонизируют кератиновые ткани и в ответ на их клетки и метаболиты возникает воспалительная реакция организма на уровне кожи. Поражения являются преимущественно кожными вследствие неспособности дерматофитов инвазировать глубокие ткани и органы. Лишь в редких случаях вовлекаются подкожные ткани (керион, гранулёма Майокки) или возникает генерализованная системная инфекция, вызванная дерматофитами.

In vitro дерматофиты повреждают кератин сочетанием ферментативного переваривания протеиназами (кератиназами) и механического давления.

In vivo их активность проявляется в зоне дифференциации на вновь синтезированном кератине. В течение инкубационного периода гифы прорастают в stratum corneum кожи и затем в волосяной фолликул и в стержень волоса, поражая новые фолликулы.

Для поддержания инфекции рост гриба координируется со скоростью продукции кератина. Инфекционный процесс останавливается и излечение начинается, когда вновь синтезирующийся здоровый кератин удаляет гифы гриба из кератинизированной зоны.

Виды рода Trichoplyton поражают кожу, волосы и ногти.

Виды рода Microsporum поражают волосы, кожу и очень редко ногти.

Виды Epidermophyton поражают кожу и ногти, но не волосы.

Предрасполагают к инфекции: наследственные факторы, нарушения микроциркуляции, повышенная температура, влажность.

Заболевания начинаются с локального воспаления в месте первичного внедрения гриба. Воспалительные изменения наиболее выражены на периферической границе очагов.

Клинические проявления заболеваний классифицируются в зависимости от анатомической локализации.

Ниже мы приводим таблицу (Табл. 2).

Таблица 2 Клинические формы дерматофитий и их наиболее частые возбудители

Болезни	Наиболее частые возбудители
Микоз волосистой части головы, бровей и ресниц	Trichophyton species, Microsporum species
Фавус	Т. schoenleinii, T. violaceum (редко), М. gypseum (редко)
Керион	Т. verrucosum, T. mentagrophytes
Микоз бороды и усов	Т. rubrum, T.mentagrophytes, T. verrucosum
Микоз гладкой кожи лица и тела	Т. rubrum and any other dermatophytes и некоторые другие дерматофиты
	Т. concentricum
Микоз складок	Е. floccosum, Т. rubrum, T. mentagrophytes
Микоз ногтей	Т. rubrum, T. mentagrophytes, редко другие трихофитоны
Микоз кистей	Т. rubrum, E. floccosum, T. mentagrophytes
Микоз стоп	Т. rubrum, Т. mentagrophytes, E. floccosum

Лабораторная диагностика

Диагноз дерматомикозов ставят на основании клинической картины и результатов лабораторных исследований.

Лабораторные исследования состоят из следующих этапов:

I. Взятие и транспортировка патологического материала;

II. Микроскопия материала;

III. Выделение и идентификация чистой культуры возбудителя с определением чувствительности к химиопрепаратам;

IV. Серологические и аллергологические исследования.

I. Взятие и транспортировка патологического материала.

Правильное взятие материала в значительной степени влияет на успех микроскопии и получение культуры, так как не все чешуйки и волосы из очагов поражения содержат элементы гриба. Патологический материал следует брать в максимально возможном количестве из очагов, не подвергавшихся местному лечению.

Кожные чешуйки соскабливают с активных периферических краев очага поражения или в межпальцевых промежутках с помощью стерильного, слегка затупленного скальпеля. Обрывки мацерированного, белесоватого рогового слоя и покрышки пузырьков берут пинцетом. Поверхностные корочки и чешуйки в центре микотических очагов содержат значительно меньше грибных элементов и менее пригодны для исследования. Дня взятия материала с шелушащихся очагов на гладкой коже и у детей можно применять прозрачную липкую ленту.

Глубокие слои пораженной ногтевой пластинки соскабливают скальпелем, извлекая рыхлые роговые массы. Для взятия материала из пораженных ногтей используют маникюрные ножницы, скальпели, пинцет, препаровальные иглы. Получение тонко размельченного патологического материала облегчает дальнейшие исследования.

При поражении волос эпиляционным пинцетом извлекают расположенные на периферии очага деформированные, белесоватые, обломанные волосы, изменившие цвет и потерявшие эластичность.

Исследование лампой Вуда

Лампа Вуда является инструментом, облегчающим диагностику и взятие исследуемого материала при клинически выраженных и субклинических формах грибковых инфекций, а также используется для контроля излеченности. Лампа Вуда - это ультрафиолетовая лампа со стеклянным фильтром, состоящим из силиката бария с 9 % окисью никеля и пропускающим длинноволновые УФ-лучи 365 нм, используется для облучения в темноте с расстояния до поверхности 20 см. Лампа Вуда вызывает флюоресценцию, индуцируемую у некоторых микроорганизмов.

Ярко-зеленая флюоресценция наблюдается при поражении волос дерматофитами рода Microsporum (M. audouinii, M. canis, М. ferrugenium, Mdistortum). Метод позволяет быстро и легко провести скриннинг значительных контингентов людей (детей) при подозрении на микроспорию. Ограничивает применение лампы Вуда увеличение этиологической роли Т. tonsurans (слабая флюоресценция) и других нефлюоресцирующих видов дерматофитов.

При разноцветном лишае (М. furfur) пораженная кожа имеет золотисто-желтую флюоресценцию, при эритразме (возбудитель -Corynebacterium minutissimum) - красную, при поражении ран бактериями рода Pseudomonas - ярко-зеленую. Артефакты при исследовании могут быть обусловлены использованием некоторых косметических и антифунгальных мазей.

Для взятия материала при стертых формах микозов волосистой части головы можно использовать стерильный вельвет, ковровый лоскут, стерильную щетку для мытья рук с нанизанным на ее ворс на глубину 0,3-0,5 мм бинтом, создающим при вычесывании волос фильтроподобный слой, на котором задерживаются чешуйки и волосы. Для посева бинт расстилают на питательной среде до появления роста гриба.

Патологический материал можно собирчть в стерильные чашки Петри; между двумя стерильными предметными стеклами, скрепленными резинками и завернутыми в бумагу; в пакеты из черной бумаги, чтобы лучше видеть чешуйки и волоски. Следует избегать использования пергаментной и вощеной бумаги, так как при разворачивании может произойти потеря и распространение патогенного материала.

Транспортировка и пересылка материала производятся в стерильных биксах с сопроводительными документами. В сопроводительной бумаге следует указывать:

1) ФИО, возраст, пол больного;

2) учреждение и ФИО врача;

3) дату взятия и характер материала;

4) предполагаемый диагноз и № истории болезни.

Для взятия и исследования материала желательно иметь следующее оборудование: микроскоп световой, фазовоконтрастное устройство, осветитель, окулярный микрометр, микологические лопатки, бактериологические петли, препаровальные иглы, скальпели, пинцеты эпиляционные, пинцеты хирургические и анатомические, ножницы, шпатели, газовые горелки или спиртовки, чашки Петри, предметные и покровные стекла, пробирки бактериологические, пробирки центрифужные, предметные стекла с лунками, колбы, воронки, пипетки мерные, глазные, пастеровские, палочки стеклянные, карандаши по стеклу, лупу.

Работа в микологической лаборатории, связанная с исследованием инфекционного материала, должна проводиться в соответствии с существующими инструкциями по технике безопасности и противоэпидемическому режиму. В лаборатории следует иметь шкафы для чистой посуды, инструментов, питательных сред, реактивов. Для дезинфекции рабочих столов, стекол с патологическим материалом, защитных клеенок используют 5 % раствор хлорамина, раствор лизола и другие средства, указанные в Инструкции МЗ СССР № 985-72 по проведению противоэпидемических и дезинфекционных мероприятий при микроспории, трихофитии и фавусе. Инструменты и посуду после использования при взятии материала подвергают обеззараживанию и тщательной механической очистке. Культуры грибов и патологический материал автоклавируют 30 мин при 120° или кипятят в течение часа. Рабочие столы и воздух в лаборатории стерилизуют УФ лучами ртутно-кварцевой лампы.

Патологический материал исследуют в кратчайший срок после его взятия. Для этого его следует разделить на 3 части:

- для микроскопии;

- для получения культур;

- для повторного контрольного исследования.

II. Микроскопия патологического материала

гриб инфекция эпидемиология дерматофит

наиболее простой и быстрый метод для установления наличия гриба в тканях. Для этого кожные и ногтевые чешуйки размельчают препаровальными иглами, а длинные волосы (при фавусе) делят на короткие фрагменты (0,1-1 мм) ребром нагретого скальпеля или прокаленной препаровальной иглой. Размельченный материал помещают на середину предметного стекла, наносят 1—2 капли 10 % КОН и слегка подогревают над пламенем до появления белесоватого ободка по краю капли, не доводя до кипения, накрывают покровным стеклом и оставляют на 5-10 мин (волосы, кожные чешуйки), 30-40 мин (ногтевые чешуйки) для мацерации и просветления.

При перегревании препарата, сильном надавливании или слишком длительной обработке происходят деформация волос и нарушение расположения спор и мицелия гриба. Чтобы обойтись без нагревания, препарат выдерживают в 20% КОН 30-60 мин. Препараты микроскопируют вначале под малым увеличением с опущенным конденсором или с прикрытой апертурной диафрагмой для затемнения поля зрения; затем избранные места просматривают при большом увеличении сухой системы с приподнятым конденсором. При незначительном количестве элементов гриба (в начале болезни) или при их нечеткости рекомендуется пользоваться фазово-контрастным устройством.

Кроме КОН, существует целый ряд растворов, применяющихся для просветления кератина роговых чешуек и волос: лактофенол (20 г 85 % молочной кислоты, 40 г глицерина, 20 мл дистиллированной воды, 20 г кристаллической карболовой кислоты и 0,05 г хлопчатобумажной синьки), хлорлактофенол (20 г кристаллического хлоралгидрата, 10 г кристаллической карболовой кислоты, 10 г молочной кислоты), 10 % водно-спиртовый раствор сульфида натрия, 15 % КОН в 15 % диметилсульфоксиде на дистиллированной воде. Оптимальными и приблизительно равноценными растворами, просветляющими кожные и ногтевые чешуйки, являются 10 % КОН, 15 % КОН+15 % ДМСО и 10 % Na2S.

Для обработки грубых роговых масс ногтей, чешуек кожи с подошв и ладоней и при массовых осмотрах применяют методы обогащения. Материал в центрифужных пробирках заливают 1,5-2 мл 20 % КОН, кипятят в водяной бане 30-60 мин, затем центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин или отстаивают 1 сутки. После сливания жидкости осадок переносят на предметное стекло пастеровской пипеткой и микроскопируют.

Ногтевые чешуйки рекомендуется обрабатывать PAS (periodic acid-Shiff) методом, который окрашивает гифы грибов в красный цвет.

Характер поражения волос дерматофитами позволяет определить родовую принадлежность гриба. Вид можно определите только по культуре.

Существуют следующие типы поражения волос дерматофитами:

I. Trichophyton ectotrix - артроспоры располагаются неправильными цепочками снаружи волоса, окружая его в основании. Пораженные волосы не флюоресцируют. Tr. ectotrix имеет две разновидности: Тг. ectotrix megasporon (крупноспоровый, размер спор 8-12 мк), характерен для поражения Т. equinum, T. gallinae, Т. megninii, Т. rubrum, Т. verrucosum и Tr. ectotrix microides (мелкоспоровый, размер спор 3—5 мк), характерен для поражения Т. mentagrophytes.

2. Trichophyton endotrix - артроспоры размером 3-5 мк параллельными цепочками располагаются только внутри волоса. Пораженные волосы не флюоресцируют: они скручиваются и ломаются, оставляя короткие пеньки или «черные точки». Данный тип поражения характерен для Т. tonsurans, T. violaceum, а также для африканских дерматофитов Т. gourvilii, T. soudanense, T. yaoundei.

3. Microsporum - артроспоры размером 2-3 мк (нечетко видны при малом увеличении) беспорядочно-мозаично располагаются внутри волоса и белесоватым чехлом окружают его стержень снаружи. Пораженные волосы ярко флюоресцируют; обламываясь, они оставляют пеньки 5-8 мм. Такой тип поражения волос характерен для М. audouinii, M. canis, M. distortum, M. ferrugineum. При надавливании на покровное стекло в препарате из пораженного микроспорумами волоса иногда можно видеть мицелиальную бахромку - так называемую «кисть Адамсона». Волосы, пораженные М. gypseum, M. fulvum, M. nanum, M. vanbreuseghemii, не флюоресцируют, споры при этом более крупные (5-8 мк) и видны при малом увеличении.

4. Trichophyton - характерное для фавуса полиморфное поражение волос септированными гифами мицелия разной ширины и артроспорами различной величины, расположенными внутри волос, содержащих пузырьки воздуха и капельки жира. Волосы не заполнены грибковыми элементами, остаются длинными; слабо флюоресцируют под лампой Вуда. Однако не следует основывать диагноз только на наличии в волосе пузырьков воздуха и капель жира, так как они иногда наблюдаются и при других типах поражения. Кроме поражения волос по типу Achorion, для фавуса характерно образование скутул,- желтых корочек, содержащих гифы и споры гриба. Данный тип поражения вызывают Т. schoenleinii, Т. violaceum, M. gypseum.

В чешуйках гладкой кожи, пораженной дерматофитами, можно видеть гифы септированного ветвистого мицелия шириной 2-4 мк, иногда цепочки из округлых или многоугольных артроспор размером 4-7 мк. В ногтевых чешуйках чаще наблюдают цепочки или скопления артроспор и реже гифы мицелия.

Следует отличать от элементов гриба такие артефакты, возникающие в препаратах, как так называемый «мозаичный гриб» (располагается по границам эпителиальных клеток, состоит из фрагментов органической природы различного размера), удлиненные кристаллы щелочи (полигональная форма); исчезают при промывании препарата, для чего с одной стороны наносят каплю воды, а с другой помещают кусочек фильтровальной бумаги и осторожно, чтобы не потерять материал, повторяют 2-3 раза, капли жира (различные размеры, отсутствие внутренней структуры), нити ваты (размер, гомогенность, неправильная форма, кисточка на конце).

В заключении по микроскопии патологического материала указывают тип поражения волос, наличие или отсутствие мицелия и спор гриба в кожных и ногтевых чешуйках. Однако считают, что гифы дерматофитов в препаратах неотличимы от мицелия дрож-жеподобных или плесневых грибов. Поэтому для определения вида возбудителя нужно сочетать микроскопию патологического материала с получением чистой культуры. При этом образцы патологического материала следует культивировать и при отрицательных результатах микроскопии.

III. Культуральное исследование

Оно необходимо для выделения и идентификации возбудителя, для определения латентного дерматофитоза, носительства дерма-тофитов здоровыми лицами, выявления дерматофитов в окружающей среде и определения чувствительности культуры к химиопрепаратам