Материалы и методы исследования

2.3.2 Материалы и методы исследования

Для исследования были использованы сухие экстракты и сухие водные извлечения, полученные ранее другими дипломниками.

Опыты проводили на белых неинбредных мышах массой 20 - 25 гр. и крысах линии Wistar массой 250 - 300 гр., полученных из коллекционного фонда НИЛ экспериментального биомедицинского моделирования ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется).

Острое асептическое воспаление вызывали введением под плантарный апоневроз левой задней лапки 1 % раствор каррагенина в объеме 0.05 мл мышам и 0.1 крысам . Величину отека определяли по разности масс воспаленной и невоспаленной лап животного, процент прироста рассчитывали по формуле:

масса больной __ масса здоровой

конечности конечности

_____________________________________ х 100%

масса здоровой конечности

Репаративная способность препаратов изучена на модели заживления кожного повреждения [Фенчин К.М., 1979]. На депилированном участке кожи спины у мышей под легким эфирным наркозом вырезали лоскут кожи размером 10 x 10 мм. Для моделирования более длительного заживления струп регулярно (через сутки) снимали. О ходе заживления судили по среднему диаметру раны и срокам полной грануляции и эпителизации раневого дефекта. Укорочение срока заживления ран расчитывали в процентах по формуле:

время полного заживления __ время полного заживления

ран в контроле ран в опыте

__________________________________________________________ х 100%

время полного заживления ран в контроле

Пролиферативное хроническое воспаление исследовали на модели "ватной" гранулемы. Стерильный ватный тампон (13 мг) имплантировали с помощью иглы (А1 -20 х 40 - 1 17 И25) крысам под кожу спины между лопатками. Исследуемые препараты вводились ежедневно со дня трансплантации в течение 7 дней. На 8 сутки животных забивали, гранулема вычленялась, взвешивалась в сыром и затем высушенном виде.

Умерщвление животных производили методом дислокации цервикального отдела позвоночника. Результаты исследований обрабатывались методом непараметрической статистики Вилкоксона - Манна - Уитни.

2.3.3 Результаты исследования

Изучение противовоспалительных и ранозаживляющих свойств растительных средств из лопуха войлочного проводили в условиях экспериментальных моделей патологических состояний у мышей и крыс. В работе воспроизводили острое асептическое воспаление (каррагениновое), хроническое пролиферативное ("ватная" гранулема) и регенерация кожного повреждения.

В первой серии экспериментов регенеративную активность препаратов исследовали на модели кожного "лоскута" у мышей. Для моделирования длительного заживления струпы периодически снимали. В связи с этим раны заживляли вторичным натяжением, для которого характерно развитие грануляционной ткани [Фенчин К.М., 1979]. Беспородные мыши - самки, используемые в эксперименте, получали сухой экстракт корней 70, сухой экстракт корней 40, сухой экстракт корней 25, сухой экстракт листьев 70, сухой экстракт листьев 40, сухой экстракт листьев 25. Для сопоставления фармакологической активности все препараты вводились в одной дозе - 50 мг / кг в лечебном режиме: через час после нанесения кожного повреждения, затем ежедневно однократно до момента заживления. Растительные средства вводились внутрижелудочно (per os). Измерение раны проводили сразу же после снятия струпа, длительность наблюдения - 20 дней. У контрольных животных, которым вводилась дистиллированная вода, полное заживление ран наблюдали на 20 сутки (табл. 6, прилож.). Существенную активацию регенерации вызвал сухой экстракт листьев 25 - уже с 5 дня раны в 1.2 раза были меньше контрольных, а на 15 сутки - полное заживление у всех животных, т.е. на 28.6 % сокращались сроки регенерации. Аналогично и сухой экстракт корней 25 на 5 и 8 день достоверно снижал средний диаметр раны в 1.2 и 1.4 раза соответственно, но судя по срокам заживления процент ускорения репарации составил 9.6 % , как и в остальных исследуемых группах (кроме сухого экстракта листьев 70).

Во второй серии экспериментов было изучено влияние растительных препаратов на хроническое воспаление, для воспроизведения которого использовали модель "ватной" гранулемы. Исследуемые извлечения вводились в меньшей дозе (25 мг / кг), с учетом коэффициента пересчета дозировки с мышей на крыс. Фитопрепараты и препарат сравнения - индометацин получали крысы -самки линии Wistar в лечебном режиме в течение 7 дней. Индометацин в исследуемой дозе обладал более выраженной антиэкссудативной активностью (37 % торможения), но не оказывал достоверного влияния на развитие грануляционной ткани (табл. 7, прилож.). Сухой экстракт корней 70 вызывал уменьшение массы сухого компонента на 21 % и на 26 % снижал содержание экссудата. Остальные извлечения из лопуха войлочного не оказали статистически значимого противовоспалительного эффекта на этой экспериментальной модели, хотя тенденция обнаружена у сухого экстракта корней 40 и сухого экстракта листьев 25.

Дальнейшие исследования проведены с препаратами, полученными на основе листьев лопуха. На модели острого асептического воспаления, вызванного каррагенином сравнивали противовоспалительное действие спиртовых извлечений (сухого экстракта листьев 40, сухого экстракта листьев 25) и сухого водного извлечения из листьев. Препараты вводились в широком диапазоне доз: 100 мг / кг; 50 мг / кг; 10 мг / кг; 1 мг / кг в превентивном режиме курсом в течение 5 дней, в последний день через час после препарата вводился каррагенин. Наилучшее противоотечное действие на этой модели оказал сухой экстракт листьев 40, т. к. три дозы препарата оказались эффективными (табл. 8, прилож.) наибольший противоэкссудативный эффект оказал этот препарат при введении его в дозе 50 мг / кг - 37 % торможения прироста веса лапки в сравнении с контрольными животными. Несколько ниже эффект при введении его в дозах 10 и 1 мг / кг - 25 и 26 % соответственно. Волнообразный характер противовоспалительных эффектов у сухого экстракта листьев 25 на 29 % снижался отек под действием препарата в дозах 100 и 10 мг / кг; отсутствие эффекта в дозах 50 и 1 мг / кг. Сухое водное извлечение из листьев на этой патологической модели не проявило противовоспалительной активности.

Таким образом, проведенные скрининговые исследования говорят о наличии фармакологической активности у спиртовых извлечений из лопуха войлочного. Неоднозначность эффектов говорит о их высокой избирательной активности зависящей от концентрации экстрагента и вида сырья. Так сухой экстракт корней 70 оказался более эффективным при хроническом воспалении, а сухой экстракт листьев 25 и сухой экстракт листьев 40 - при остром асептическом воспалении. Наилучший стимулятор репаративной регенерации - сухой экстракт листьев 25. Выявленная фармакологическая активность свидетельствует о перспективности данных препаратов и требует дальнейшего более углубленного их исследования.

Часть 3. Выделение сесквитерпеновых лактонов