2.4 Моносахаридный анализ
1) Фильтрат 1 и Фильтрат 2 обессоливаем на колонке Sepharose G250, элюент 10мМ пиридин и 10мМ уксусная кислота рН 4,5.
2) Высушиваем при 600С до полного отсутствия воды.
3) Добавляем 400 мл ТФУ (Трифторуксусная кислота), помещаем в сушильный шкаф на 1 час при температуре 1200С.
4) Затем опять сушим при 600С
5) Растворяем водой и определяем моносахаридный соcтав на Daionex (Данные моносахаридного состава смотри в таблице 1).
6) Мы объединили наши пробирки в следующие фракции до целлюлазной обработки: фракция 1 5–10; фракция 2 11–16; фракция 3 17–23; фракция 4 24–26; фракция 5 27–35.
Фракции после целлюлазной обработки: фракция 1 6–10; фракция 2 11–16; фракция 3 17–19; фракция 4 20–24; фракция 5 25–26; фракция 6 27–31.
Рисунок 1 – Распределение прочносвязанных полисахаридов во фракциях после растворения целлюлозы до ферментативной обработки.
Рисунок 2 – Распределение прочносвязанных полисахаридов после растворения после ферментативной обработки
Таблица 1. Моносахаридный состав во фракциях
Рамноза | Арабиноза | Галактоза | Глюкоза | Ксилоза | Галактуроновая кислота | Глюкуроновая кислота | |
Фракция 1, после целлюлазы | 49.290 | 33.680 | 68.173 | 7.624 | 5.855 | 254.246 | 1.166 |
Фракция 2, после целлюлазы | 61.981 | 43.261 | 99.500 | 6.804 | 13.317 | 311.360 | 3.365 |
Фракция 3, после целлюлазы | 25.478 | 17.145 | 79.425 | 6.605 | 31.317 | 161.033 | 10.089 |
Фракция 4, после целлюлазы | 6.349 | 7.295 | 48.161 | 25.828 | 86.452 | 67.533 | 10.577 |
Фракция 5, после целлюлазы | 4.020 | 14.716 | 40.078 | 40.401 | 210.336 | 3.171 | 5.546 |
Фракция 6, после целлюлазы | 1.678 | 4.407 | 13.217 | 28.017 | 136.191 | 6.781 | 1.291 |
Фракция 1, до целлюлазы | 0 | 0 | 0 | 0 | 0.535 | 358.507 | 0 |
Фракция 2, до целлюлазы | 0.556 | 0.481 | 2.689 | 5.364 | 1.107 | 0.476 | 0 |
Фракция 3, до целлюлазы | 12.596 | 15.664 | 39.576 | 12.444 | 0 | 21.317 | 1.393 |
Фракция 4, до целлюлазы | 20.762 | 24.131 | 54.572 | 11.218 | 54.753 | 67.032 | 2.955 |
Фракция 5, до целлюлазы | 82.195 | 151.536 | 325.976 | 131.493 | 0 | 426.007 | 19.982 |
0 комментариев