2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 2.1. Методы исследований 2.1.1. Получение микробной суспензии Питательный агар, который готовится согласно прописи, заливают предварительно по 5-10 мл в пробирки, которые оставляют наклонными в специальном штативе до полного застывания среды. Бактериологической петлей отбирают клетки микроорганизмов и вводят петлю в пробирку со скошенным агаром до дна. Слегка касаясь бактериологической петлей поверхности среды, проводят от дна пробирки вверх зигзагообразную линию, тем самым, засевая культуру микроорганизмов. После посева пробирки помещают в термостат (30С) на 1 сутки (по истечению этого срока пробирки извлекают из термостата) и заливают в них по 2.0-3.0 мл физиологического раствора (ФР). Осторожно отделяют микробную культуру от агара постепенным встряхиванием и покачиванием пробирки. Полученную суспензию хранят в холодильнике. 2.1.2. Определение количества жизнеспособных клеток методом высева на плотную среду Микробную суспензию разводят в стерильном физиологическом растворе, при этом используя один и тот же коэффициент разведения. Посев осуществляют из 5-ого, 6-ого и 7-ого разведений перенося 0, 1 мл суспензии на поверхность питательного агара в чашках Петри. Затем суспензию равномерно распределяют шпателем по питательному агару. Высев из каждого разведения осуществляют стерильной пипеткой. После посева чашки помещают в термостат (30С) на сутки. Количество жизнеспособных клеток в 1 мл суспензии рассчитывают по следующей формуле: M=a * 10z/ V; ( 2.1 ) | |||||||||||
БГТУ 02.00.ПЗ | |||||||||||
Изм. | Кол.уч. | Лист | № док. | Подпись | Дата | ||||||
Разраб. | Ковалевич А. | Экспериментальная часть | Стадия | Лист | Листов | ||||||
Пров. | 1 | 18 | |||||||||
Консульт. | БГТУ 7140607 2004 | ||||||||||
Н.контр. | |||||||||||
Утв. |
где M – количество клеток в 1 мл исходной суспензии;
а - количество колоний, которые выросли на чашках Петри;
Z - порядковый номер разведения суспензии;
V – объем суспензии, взятой для высева на чашку Петри, мл.
Величину оптической плотности измеряют с помощью фотоколориметра ФЭК-56М. Для измерения светорассеяния выбирают светофильтр, который обеспечивает максимум пропускания света данной суспензией. В результате опытов получили, что максимум пропускания света обеспечивает длина волны 540 нм.
2.1.3 . Изучение сорбции металлов мхом
Для эксперимента на аналитических весах взвешивают образцы мха массой 200+0,5 мг и помещают их в стеклянные флаконы с привинчивающимися крышками объемом 100мл. Затем в эти же флаконы заливают по 50 мл раствора металла различной концентрации (для эксперимента были выбраны следующие концентрации металлов: 0,1; 0,02;0,005; 0,0001; 0,00002; 0,00001 моль/л), которые готовят путем последовательного разведения исходного раствора соли металла (0,1 моль/л). Флаконы закрывают и оставляют на 24 часа при комнатной температуре (18+2С) при периодическом перемешивании. После чего мох из суспензии отфильтровывают через бумажный фильтр в колбы для титрования и титруют по следующим методикам.
2.1.3.1. Определение меди комплексонометрическим методом
В качестве источника меди использовали сульфат меди.
Ионы меди образуют с ЭДТА комплексы голубого цвета с константой устойчивости 6,3*1018 (ионная сила 0,1: 20 С). Анализируемый раствор разбавляют водой до метки в мерной колбе. Равновесные растворы с исходной концентрацией 0,100 моль/л после фильтрования в количестве 48 мл разбавляют водой в мерной колбе до 100 мл. После перемешивания отбирают пипеткой аликвотную часть раствора в коническую колбу, прибавляют 20 мл дистиллированной воды, 5 мл буферного раствора, на кончике металлического шпателя 20-30 мг индикаторной смеси, растворяют ее и титруют раствором ЭДТА 0,0500 М до изменения окраски из зеленовато-желтого цвета в чисто-фиолетовую. Измеряют объем ЭДТА и вводят 1 каплю 2 М раствора NH4ОН, если цвет раствора остается фиолетовым, титрование прекращают; если от добавления аммиака окраска
изменилась в желтую или желто-зеленую, продолжают титрование раствором ЭДТА до устойчивой фиолетовой окраски.
В качестве буферного раствора используют ацетатный буфер (ацетат аммония, 50% раствор) с pH6. Титрование ведут на холоду (при комнатной температуре 18+2С).
В качестве металлоиндикатора используют мурексид (смесь с хлоридом натрия в соотношении 1:100).
Массу определяемого вещества рассчитывают по формуле (2.2.):
m= (V1*Vж*c1*M)/(V2*1000) ( 2.2 )
где – V1 – объем раствора ЭДТА, пошедшего на титрование;
V2 - объем анализируемого равновесного раствора (аликвотная часть);
c1 - молярная концентрация ЭДТА;
M – молярная масса определяемого вещества;
Vж - объем мерной колбы, из которой отбирали аликвотную часть.
0 комментариев