ВИЗНАЧЕННЯ РIВНЯ CD3+,CD4+,CD5+,CD8+ ЛIМФОЦИТIВ У

2.5 ВИЗНАЧЕННЯ РIВНЯ CD3+,CD4+,CD5+,CD8+ ЛIМФОЦИТIВ У

ПЕРИФЕРИЧНIЙ КРОВI.

1.Кров брали стерильно з лiктьовоi вени вранцi, до вжи-

вання iжi. Лiмфоцити видiляли з гепаринiзованоi кровi цен-

трифугуванням на градiснтi Фiкол-Вiрографiну (густина 1,077

г/мл).

2.1-0,1 млн. лiмфоцитiв в об'смi 50 мкл. вносили в цен-

трифужнi пробiрки i до клiтин додавали 5 мкл. моноклонально-

го антитiла CD8 i iнкубували 30-45 хв. при +4 С.

 3.Додавали 150 мкл. розчину Хенкса i центрифугували 5

хв. при g 200.

4.Вилучали супернатант. Потiм вносили 50 мкл. розчину

Хенкса, клiтини суспендували, додавали 150 мкл. розчину Хен-

кса i центрифугували 5 хв. при g 200.

5.Вилучали супернатант. До осаду вiдмитих клiтин дода-

вали 50 мкл. F(ab)2-Фрагментiв овечих антитiл до Ig мишi,

помiчених ФIТЦ i розбавлиних 1:100. Для розведення викорис-

товували фiзрозчин, забуферений фосфатом (РВS), що мiстиь

0,5% желатину i 0,5% азиду натрiю. Клiтини суспензували i

iнкубували 30 хв. при 4 С.

6.Клiтини 2 рази вiдмивали як указано в п.п.3-4.

7.Пiсля остаточного видалення супернатанту клiтини ви-

носили на предметне скельце i помiщали в пари формалiну для

фiксацii на 10-1 хв. Мiченi клiтини аналiзували з допомогою

мiкроскопу з люмiнiсцентною насадкою ЛН-30МС. Статистичну

обробку матерiалiв проводили звикористанням методики Андрю-

щенко.

2.6 СТАТИСТИЧНА ОБРОБКА ДАНИХ

Одержанi цифровi результати були обробленi методом

варiацiйноi статистики по Стьюденту за допомогою програми

складеноi аспiрантом кафедри алгебри Андрущенко. Оскiльки

програма написана на мовi Ассемблер, то датиii ропечатку не-

мас можливостi, а тому нижче наводиться, як приклад, ре-

зультат обробки даних цiсю програмою.

Розрахунок основних характеристик вибiрки

-----------------------------------------

Показник: cd

1. 2.00000

2. 3.00000

3. 7.00000

4. 8.00000

Середне арифметичне - 5.000

Дисперсiя - 75.111

Середне квадратичне вiдхилення - 2.944

Похибка середнього арифметичного - 1.472

Коефiцiент варiацii - 58.878 %

Коефiцiент асиметрii - 0.000

Ексцес - -0.417

Програма оброблялася на ПЕОМ IBM PC/XT 286

_@ 3. СТАН КЛIТИННОГО IМУНIТЕТУ У

_@ ПРАКТИЧНО ЗДОРОВИХ СТУДЕНТIВ ЧДУ.

Нами проведене диференцiальне дослiдження показникiв клiтин-

ного iмунiтету у студентiв 4 курсу факультетiв фiзвиховання та

природничого факультету.

Встановлено, що у практично здорових волонтерiв, що нав-

чаються на 4-му курсi факультету фiзвиховання та природничому фа-

культетi показники рiвня лейкоцитiв в периферичнiй кровi статис-

тично достовiрно не вiдрiзняються.(Табл.1).

Табл.N1. Рiвень лейкоцитiв та лiмфоцитiв у практично здорових во-

лонтерiв студентiв 4-го курсу природничого факультету

та факультету фiзвиховання ЧДУ

 ┌─────┬──────────────────┬───────────┬───────┬──────┬──────┐

 │N п/п│Групи пiддослiдних│Показники │Лейко- │Лiмфо-│Лiмфо-│

 │ │ │статистич- │ти │цити │цити │

 │ │ │ноi обробки│x 10/л │ % │ г/л │

 ├─────┼──────────────────┼───────────┼───────┼──────┼──────┤

 │ 1 │Практично здоровi │ M │ 6,3 │32,5 │1,9 │

 │ │волонтери студенти│ б │ 1,27 │12,4 │0,2 │

 │ │факультету фiз- │ m │ 0,5 │5,3 │0,1 │

 │ │виховання │ n  │ 6 │6 │6 │

 ├─────┼──────────────────┼───────────┼───────┼──────┼──────┤

 │ 2 │Практично здоровi │ M │ 6,7 │24,5 │1,5 │

 │ │волонтери студенти│ б │ 1,4 │9,6 │0,7 │

 │ │природничого │ m │ 0,6  │3,8 │0.1 │

 │ │факультету │ n │ 6 │6 │6 │

 ├─────┴──────────────────┼───────────┼───────┼──────┼──────┤

 │ │ t │ 0,63 │0,5 │1,3 │

 │ │ p │ >0,05 │>0,05 │>0,05 │

 └────────────────────────┴───────────┴───────┴──────┴──────┘

Прицьому вiдносна i абсолютна кiлькiсть лiмфоцитiв у пе-

риферичнiй кровi обох груп знаходилась в межах вiковоi норми.

Ми не спостерiгали статистично достовiрних рiзниць рiвня

вiдносноi iабсолютноi кiлькостi лiмфоцитiв.

Вiдомо, що лiмфоцити с гетерогенною популяцiсю. В ос-

таннiй час субпопуляцii диференцiюють по експресii поверхне-

вих маркерiв [ ]

Взасмозв'язок фенотипiчних i функцiональних варiацiй

Т-клiтин реалiзусться через змiну iх рецепторного поля та

експресii молекул, що приймають участь у виконаннi ефектор-

ноi функцii клiтин [ ]

Вiдомо, що для Т-клiтин характерна експресiя Т-клiтин-

них рецепторiв. До таких рецепторiв вiдносяться поверхневi

маркери CD3 [ ]

Експресiя поверхневого маркеру СD5 проявлясться на бiльш

раннiх стадiях розвитку Т-клiтин.

Вiдомо, що навiть претомоцити можуть мати такий фенотип:

 CD7+2+1-38+4-8-3-ТКР-

Таким чином поява у кровi лiмфоцитiв, що експресують по-

верхневий маркер CD5, але не експресують СD3, свiдчать про

появу в периферичнiй кровi менш зрiлих лiмфоцитiв. Про поя-

ву в кровi менш зрiлоi субпопуляцii Т-клiтин ми судили по

рiзницi мiж кiлькiстюлiмфоцитiв СD3+ та СD5+.

Нами встановлене статистичнодостовiрне пiдвищення числа

СD5+ лiмфоцитiв у практично здорових волонтерiв, що нав-

чаються на першому курсi факультету фiзичного виховання ЧДУ.

(Табл. N 2).

Табл. N 2. Експресiя СD3- i СD5- антигенiв на

поверхнi лiмфоцитiв периферичноi кровi

практично здорових волонтерiв студентiв

1-го та 4-го курсу факультету фiзичного

виховання ЧДУ.

┌─────┬──────────────────┬────────────┬───────────┬───────────┐

│N п/п│Група пiддослiдних│Показники │СD3+ │ СD 5+ │

│ │ │статис- ├───────────┼─────┬─────┤

│ │ │тичноi │ │ │ │

│ │ │обробки │ % г/л │ % │г/л │

├─────┼──────────────────┼────────────┼─────┬─────┼─────┼─────┤

│ 1 │Практично здоровi │ M │62,3 │1,2 │65 │1,3 │

│ │волонтери студенти│ б │4,4 │0,13 │3,9 │0,19 │

│ │4-го курсу │ m │1,97 │0,05 │1,6 │0,09 │

│ │  │ n │6 │6 │6 │6 │

├─────┼──────────────────┼────────────┼─────┼─────┼─────┼─────┤

│ 2 │Практично здоровi │ M │63,8 │1,05 │69,6 │1,1 │

│ │волонтери студенти│ б │0,97 │0,5 │2,4 │0,6 │

│ │1-го курсу │ m │0,4 │0,2 │0,98 │0,2 │

│ │ │ n │6 │6 │6 │6 │

│─────┴──────────────────┼────────────┼─────┼─────┼─────┼──── │

│ │ t │0,75 │1 │2,6 │1,5 │

│ │ p │>0,05│>0,05│<0,05│>0,05│

└────────────────────────┴────────────┴─────┴─────┴─────┴─────┘

Встановлено вiдсутнiсть статистично достовiрноi рiзницi

в експресii поверхневого маркеру СD + у практично здорових

волонтерiв - студентiв 1-го та 4-го курсiв факультету фiзич-

ного виховання.